家蚕的生长发育主要受咽侧体分泌的保幼激素（Juvenile hormone，JH）和前胸腺分泌的蜕皮激素（Molting hormone，MH）的直接调控，JH的主要作用是抑制家蚕的发育、变态和决定虫态，而MH则促进蜕皮和发育变态。家蚕的丝腺是一种典型的幼虫型器官，其生长发育也受JH和MH的调节。我国从70年代初期起即开展保幼激素类似物（Juvenile hormone analogue，JHA）和植源性蜕皮激素（MH）应用于养蚕生产的试验，研发出利用外源昆虫激素提高产丝量和促进熟蚕上蔟的技术。关于外源激素的增丝机理，前人从家蚕的生长发育、氨基酸代谢、后部丝腺的核酸和蛋白质合成及丝腺细胞的超微结构等方面进行了广泛研究，但是从分子水平研究MH和JHA对丝蛋白基因表达的影响目前还很少报道。本文采用半定量RT-PCR技术（Semi-quantitative RT-PCR，SqRT-PCR）及荧光定量PCR（Realtime quantitative PCR，RT-qPCR）技术，测定了家蚕4龄和5龄不同发育时期4个丝蛋白基因（Fib-H、Fib-L、Ser-2、Ser-3）表达量的变化规律以及利用不同剂量的MH和JHA处理对丝蛋白基因表达的影响，从mRNA转录水平上探讨了MH和JHA的增丝机理，主要结果如下：1测定了4龄起蚕到5龄熟蚕4d11个时间点4种丝蛋白基因的表达活性。结果发现，Fib-H、Fib-L及Ser-3基因的表达规律相似，总体上4龄期表达量明显低于5龄，从5龄起蚕以后表达量逐渐上升，至熟蚕前1d或熟蚕后2d达到高峰，此后迅速下降；Ser-2基因两个转录本的表达规律基本一致，与以上3个基因相比，Ser-2基因在4龄期存在相对较高的表达量，但在4龄眠期表达量明显降低，从5龄起蚕以后表达量逐渐上升，Ser-2短片段和长片段分别从5龄96h和144h之后表达量开始降低，到熟蚕期基本达到最低值。2用不同剂量的MH和JHA在4龄和5龄期不同发育阶段处理，分别于处理后12h和48h测定4种丝蛋白基因表达量的变化，并观察蚕的生长发育情况。结果表明，外源MH和JHA对家蚕生长发育和丝蛋白基因表达的影响是非常复杂的，不仅同一种激素因处理时期和剂量的不同而表现出不同的作用，而且对不同丝蛋白基因表达的影响也不同，没有统一的规律性。一方面可能与不同发育阶段蚕体内源激素的活性、丝蛋白基因的表达状态以及外源激素对内分泌腺的反馈调节有关；另一方面不同丝蛋白基因在丝腺不同部位的细胞中表达，不同丝腺细胞对激素的反应可能是不同的。3根据前人报道的应用MH和JHA増丝技术，分别在5龄前期用MH处理、5龄中期用JHA处理，测定从激素处理至熟蚕期间Fib-H、Ser-2基因表达的变化。结果表明，低剂量的MH和JHA分别于5龄前期和5龄中期处理，5龄发育经过分别延长24h和56h，且熟蚕体重均显著增加，茧层量和茧层率都有明显提高。在用两种激素处理后24h，Fib-H和Ser-2基因的表达均有明显上调，之后出现下降趋势，Fib-H表达量一直低于对照组，尤以JHA处理更加明显；而Ser-2基因的表达，两种激素处理区均在熟蚕前1d显著上升，并高于对照组。因此认为，5龄前期用MH及5龄中期用JHA处理，短期内能促进丝蛋白基因的表达，但增丝的主要原因是由于延长了发育经过、增加了食桑量所致。