【摘 要】
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目的:构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21,探讨其是否能诱导动物免疫应答及抵抗眼角膜HSV-1的感染。方法:提取HSV-1基因组DNA,PCR扩增获得包膜糖蛋白C(gC)
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目的:构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21,探讨其是否能诱导动物免疫应答及抵抗眼角膜HSV-1的感染。方法:提取HSV-1基因组DNA,PCR扩增获得包膜糖蛋白C(gC)基因。以pRSC-gD-IL-21质粒为模板(本实验室2011年构建成功),将gC与包膜糖蛋白D(gD)进行基因融合,构建重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21并进行相关鉴定,用纳米材料壳聚糖(chitosan)包裹,并进行质粒DNA的包封率检测及DpnI保护实验,最后采用粘膜接种的方式分别以pRSC-gD.gC-IL-21+chitosan、pRSC-gD-IL-21+chitosan、pRSC+chitosan 及 chitosan四组免疫小鼠3次,每次间隔2周,末次免疫2周后进行各组小鼠血清中特异性中和抗体、脾淋巴细胞特异性靶细胞杀伤活性、泪液中特异性sIgA分泌水平的检测并进行比较,同时评价各组小鼠对病毒攻击角膜的免疫保护作用。结果:经测序、酶切、PCR、Western Blot鉴定后表明,重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,目的基因插入正确,在真核细胞内有目的蛋白表达。壳聚糖包裹率高,与对照组相比,该疫苗在小鼠体内产生了更强的特异性中和抗体、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及自然杀伤细胞(NK)杀伤活性增强、泪液中特异性sIgA水平增高,同时使小鼠产生了更强的针对眼角膜HSV-1感染的免疫保护作用。结论:DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,壳聚糖包裹率高,与疫苗pRSC-gD-IL-21相比,加入免疫原gC后,能诱导小鼠产生更强的免疫应答及针对HSV-1眼部感染的免疫保护作用,能够更好的预防单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)的发生、发展,为下一步最终应用于复发性HSK鼠眼模型打下了基础。
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