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目的：通过siRNA靶向沉默Akt基因，探讨其对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞生长的影响作用，为卵巢癌的基因治疗，提供新的实验依据。方法：1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌SKOV3/DDP细胞，检测siRNA靶向沉默Akt后对卵巢癌细胞生长的影响。2、用转染试剂Lipofectamine2000包裹不同浓度荧光标记的siRNA（FAM-siRNA）转染SKOV3/DDP细胞，采用流式细胞仪检测其转染效率，确定siRNA最佳转染浓度。3、筛选有效Akt siRNA片段，实验分为5组：①空白对照组（control）②Akt siRNA-1③Akt siRNA-2④Akt siRNA-3⑤阴性对照组（Negative Control，NC）。转染48h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组Akt mRNA的表达情况，筛选出Akt siRNA片段。4、Akt siRNA片段转染到卵巢癌SKOV3/DDP细胞后对细胞生长的影响。将筛选出的Akt siRNA片段经Lipofectamine2000转染到卵巢癌SKOV3/DDP细胞，实验分3组：①空白对照组（control）②Akt siRNA转染组③阴性对照组（NegativeControl，NC）。5、转染48h后，采用流式细胞仪分别检测各组的细胞周期、细胞的凋亡变化；CCK8法检测细胞的增殖活性；Western Blot法检测Akt及p-Akt蛋白的表达水平。结果：1、Lipofectamine2000分别包裹50nM、80nM、100nM的FAM-siRNA转染SKOV3/DDP细胞6h后，流式细胞仪检测结果示：转染效率都在80%以上，考虑lipo2000对细胞的毒害作用，siRNA为50nM时转染效率最佳。2、转染48h后，qRT-PCR检测各组Akt mRNA的表达情况示：3个siRNA片段组Akt mRNA的表达水平与control组、NC组比较，表达水平明显下调，差异有统计学意义（P<0.05），其中siRNA-2片段降低Akt mRNA的表达最显著。NC组与control组相比，无明显差异（P>0.05）。本实验选取siRNA片段Ⅱ作为有效的siRNA片段。3、转染48h后，采用流式细胞仪检测各组的细胞周期，结果示：Akt siRNA转染组G0/G1期所占比例与control组、NC组比较明显上调，S期、G2/M期所占比例与control组、NC组比较，各期所占比例明显下调，差异均具有统计学意义（P<0.05），NC组与control组比较，无明显差异（P>0.05）。4、转染48h后，采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡，结果示：Akt siRNA转染组的早、晚期凋亡率，与control组及NC组相比，其凋亡率明显增高，差异有统计学意义（P<0.05），NC组和control组相比，无明显差异（P>0.05）。5、转染24h、48h、72h后，CCK-8结果示：随着时间推移，Akt siRNA特异性转染组细胞生长明显受限，抑制率相应升高，转染后72h，细胞生长受到最明显的抑制，NC组与control组相比，细胞生长程度无明显改变。6、转染48h后，Western Blot法结果示：Akt siRNA特异性转染组Akt、p-Akt的蛋白表达，与control组、NC组相比，明显降低蛋白表达水平，差异有显著性（P<0.05），NC组和control组相比，差异不显著。结论：1、siRNA沉默Akt基因，下调Akt mRNA的表达，可有效抑制SKOV3/DDP细胞的生长。2、siRNA沉默Akt基因能明显抑制人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的增殖活性，阻滞细胞周期在G0/G1期，并且下调Akt在SKOV3/DDP细胞中蛋白的表达，其抑制机制可能与敲除PI3K/Akt信号通路中Akt基因，阻断其对下游多种效应分子的活化，促进细胞凋亡有关。3、siRNA特异性沉默人卵巢癌SKOV3/DDP细胞中Akt基因，抑制该肿瘤细胞的生长，有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。