褶纹冠蚌(Cristaria plicata)分布广泛,是我国重要的淡水育珠蚌之一,具有一定的经济价值。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)是一种细胞核的蛋白,在细胞内有多种作用。本文利用RT-PCR,克隆出褶纹冠蚌HMGB1cDNA全长。褶纹冠蚌HMGB1cDNA全长621bp,编码207个氨基酸,预测编码的蛋白分子量大小为24KDa,预测等电点PI=5.7。本文还将基因扩增产物和表达载体pET-30a经Kpn I、EcoRI双酶切之后,连接并构建重组表达质粒,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)中,OD600=0.65时加入IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导12h,得到大量可溶性蛋白,用Ni2+亲和层析镍柱纯化,最终得到较纯的目的蛋白。通过向SD小鼠注射rCpHMGB1,使SD小鼠血清中的TNF-α含量出现明显上升,在4h处出现峰值,并随着rCpHMGB1浓度的上升,TNF-α的浓度上升。说明了重组的褶纹冠蚌rHMGB1具有使小鼠致炎的能力。组蛋白H2A (Histone H2A)是一种富含赖氨酸的组蛋白。本文利用RT-PCR等分子生物学技术,克隆出褶纹冠蚌组蛋白H2AN末端多肽cDNA。其全长120bp,编码39个氨基酸,预测编码的蛋白分子量大小为4.0KDa,预测等电点PI=12.3。本文将基因扩增产物和表达载体pET-30a和pET-32a经Kpn I、EcoRI双酶切之后,连接并构建重组表达质粒,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)中,加入IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导8h,得到大量目的蛋白。