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食物过敏现已成为一个新兴的公众性健康问题,发达国家中超过8%的未成年人和2%的成年人受食物过敏的困扰。由于避免接触到过敏原是针对过敏患者最有效的防治手段,所以建立大通量、快速、灵敏的过敏原检测方法及开发相关产品显得尤为重要。食物中常见过敏原有八类,本文旨在建立其中的鸡蛋、牛奶、花生和虾这四种过敏原的ELISA检测方法。卵清蛋白是最主要的鸡蛋过敏原之一。本文以鸡蛋卵清蛋白免疫BALB/c小鼠,取高效价小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,共筛选出17株特异性抗卵清蛋白的杂交瘤细胞,命名为OVA-NO.1～17。利用体内诱生法,制备了这17株细胞的腹水,对应命名为anti-OVA-NO.1～17。然后用过碘酸钠法将HRP标记在单抗anti-OVA-NO.1～17上。经过两两配对筛选,最后确定anti-OVA-NO.17作包被捕获抗体、HRP-anti-OVA-NO.15作酶标检测抗体。通过ELISA条件优化实验,最后建立的的卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法检测限达到0.51 ng/mL,线性范围为1.95-500 ng/mL。对建立的ELISA检测方法进行了添加回收和实际样品检测,结果表明所建立的ELISA方法稳定性好、准确度可信,可应用于实际检测。酪蛋白是牛奶中含量最高的蛋白质,也是牛奶中的主要过敏原之一。本文采取上述同样的单克隆抗体制备方法,筛选出14株特异性抗酪蛋白的杂交瘤细胞株,命名为casein-NO.1～14,同样也制备了这14株细胞的腹水并标记了HRP。通过筛选,最终以anti-casein-NO.8为捕获抗体,以HRP-anti-casein-NO.11为检测抗体,通过优化的ELISA条件,建立了酪蛋白双抗体夹心ELISA检测方法,检测限为0.55 ng/mL,线性范围为0.78-100 ng/mL。花生凝集素是花生中的过敏原之一。以封闭了糖结合位点的花生凝集素为免疫原,成功的制备了抗花生凝集素的兔源和鼠源多克隆抗体。以鼠源抗花生凝集素多克隆抗体为捕获抗体,兔源抗花生凝集素多克隆抗体为检测抗体,优化ELISA工作条件后,建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测限达到0.49 ng/mL,线性范围为0.78-100 ng/mL。对建立的花生凝集素ELISA检测方法进行了添加回收和实际样品检测实验,结果表明所建立的ELISA方法精密度高、稳定性强、准确度好,能应用于实际检测。虾原肌球蛋白是虾中最主要的过敏原。本文经过去脂、浸提、盐析和凝胶过滤层析,从虾仁中提取纯化了纯度在90%以上的虾原肌球蛋白。用制备的原肌球蛋白为免疫原,制备出虾原肌球蛋白的兔源和鼠源多克隆抗体。以鼠源抗原肌球蛋白多克隆抗体为捕获抗体,兔源抗原肌球蛋白多克隆抗体为检测抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测限为6.25 ng/mL,线性范围为6.25-1600 ng/mL。