运用酶学分析方法和组织学技术,研究了水体中不同浓度氨氮、亚硝酸盐、pH和盐度胁迫对拟穴青蟹生理生化以及鳃、肝胰腺显微结构的影响,探讨环境因子胁迫下拟穴青蟹生理生化的响应及免疫防御机制,以期为其健康养殖和水质管理提供理论指导,并为甲壳动物环境生理学研究积累基础资料。本试验的主要结果和结论如下:1氨氮胁迫对拟穴青蟹生理生化以及鳃、肝胰腺显微结构的影响过滤海水中分别添加氨氮（以氯化铵作为氨氮源）0 mg·L^-1（对照组）、10mg·L^-1、20 mg·L^-1、30 mg·L^-1、40 mg·L^-1,胁迫24 h,48 h,72 h,96 h对拟穴青蟹生理生化及组织、器官显微结构影响的结果表明,拟穴青蟹血清PO活性在氨氮胁迫前期（24 h、48 h）随氨氮浓度的升高而增高,而在胁迫后期（72 h、96 h）却无明显规律;各组的拟穴青蟹血清PO活性,胁迫48 h时最高,与其它各组间差异显著（P<0.05）,胁迫72 h时均为最低,这与拟穴青蟹THC变化有些相似,各组拟穴青蟹THC也是在胁迫48 h时最高,但在胁迫96 h时最低。此外,高浓度胁迫（C30、C40）时,拟穴青蟹THC一直处于较低水平,C40组与其它各组间差异显著（P<0.05）。拟穴青蟹鳃中SOD活性除C40组外,其余各组在胁迫前期随氨氮浓度的升高而升高,而在胁迫后期则随氨氮浓度的升高而下降,C40组拟穴青蟹鳃中SOD活性随胁迫时间的延长而一直呈下降趋势;血清SOD活性与鳃SOD活性变化趋势相似,但C40组拟穴青蟹血清SOD活性在氨氮胁迫48 h时最大,且与其它各组间差异显著（P<0.05）;各组拟穴青蟹肝胰腺和肌肉的SOD活性变化趋势与鳃SOD活性相同。各组拟穴青蟹鳃和肌肉的SOD活性与PO活性、THC变化有相似之处,均在胁迫48 h时最大,肝胰腺SOD活性则在胁迫72 h时最大。各组拟穴青蟹鳃GSH-PX活性在氨氮胁迫24 h、48 h和72 h时随氨氮浓度的升高而下降,胁迫96 h时随氨氮浓度的升高而增大;血清GSH-PX活性变化与鳃GSH-PX活性变化趋势完全相反,各组拟穴青蟹血清GSH-PX活性在胁迫24 h、48 h和72 h时,随氨氮浓度的升高而增大,胁迫96 h时随氨氮浓度的升高而下降;各组拟穴青蟹肝胰腺和肌肉GSH-PX活性变化与肝胰腺SOD活性变化相似,C40组肝胰腺GSH-PX活性均在氨氮胁迫48 h时达到最大值。血清Ua、U_L与肝胰腺SOD活性变化趋势相同。拟穴青蟹鳃Na⁺-K⁺-ATPase活性除C40组外,其余各组在氨氮胁迫24 h时随氨氮浓度的升高而增大,而在氨氮胁迫48 h、72 h和96 h时则随氨氮浓度的升高而下降;C40组拟穴青蟹鳃Na⁺-K⁺-ATPase活性随胁迫时间的延长而一直呈下降趋势,C40组、C30组与其它各组间差异显著（P<0.05）,这与THC在高浓度处于较低水平吻合;拟穴青蟹鳃Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性变化趋势与Na⁺-K⁺-ATPase活性变化相似,但C40组却随胁迫时间的延长而增强,这可能是拟穴青蟹处于蜕皮前期的生理信号。各组拟穴青蟹鳃和肝胰腺ACP活性变化与Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性变化一致;而肌肉ACP活性则随氨氮浓度的升高和胁迫时间的延长而下降,胁迫前期与胁迫后期差异显著（P<0.05）;鳃AKP活性在胁迫24 h、72 h和96 h时随氨氮浓度的升高而下降,但在胁迫48 h时却随着氨氮浓度的升高而增大;肝胰腺和肌肉的AKP活性变化与血清SOD活性变化一致。拟穴青蟹鳃及肝胰腺组织细胞结构在氨氮胁迫下发生了氧化损伤,作用于鳃上皮细胞及肝胰腺肝小管引起细胞结构受损,影响了拟穴青蟹组织、器官正常的生理生化功能,且这种损伤随着水体中氨氮浓度的升高而加剧。2亚硝酸盐胁迫对拟穴青蟹生理生化影响过滤海水中分别添加NO₂-N（以亚硝酸钠为亚硝酸氮源）浓度分别为0.00mg·L^-1、0.25 mg·L^-1、0.50 mg·L（-1）、1.00 mg·L（-1）、1.50 mg·L（-1）、2.00 mg·L（-1）,胁迫48 h、96 h和144 h时对拟穴青蟹生理生化影响的结果表明,各组拟穴青蟹血清PO、肌肉和肝胰腺的SOD活性、Ua以及肌肉AKP活性和肝胰腺U_L均随NO₂-N浓度的升高和胁迫时间的延长而逐渐下降,肌肉和肝胰腺的ACP活性、肝胰腺AKP活性和肌肉U_L则逐渐升高。3 pH胁迫对拟穴青蟹生理生化影响将海水pH分别调节到4.5,6.0,7.5,9.0,10.5,研究拟穴青蟹在pH胁迫24 h、72 h、120 h、168 h和216 h时的结果表明,pH对拟穴青蟹血清PO和SOD活性及Ua影响显著,对肌肉和肝胰腺SDO活性影响显著（P<0.05）;相同pH下肝胰腺SOD活性差异显著（P<0.05）。4盐度胁迫对拟穴青蟹生理生化影响将海水盐度分别调节为5,15,25,35,研究拟穴青蟹在盐度胁迫24 h、48h、72 h和96 h的结果表明,盐度显著影响拟穴青蟹血清PO活性和SOD活性,且表现出明显的时间效应性,各组拟穴青蟹在盐度低于或高于25时,其肌肉SOD活性升高,同浓度组的拟穴青蟹肝胰腺SOD活性则随着盐度胁迫时间的延长而呈现出先降后升的趋势;鳃中Na⁺-K⁺-ATPase、Ca²⁺-Mg（2+）-ATPase活性随盐度降低均升高,随着胁迫时间延长,Na⁺-K⁺-ATPase活性呈现不同的变化规律,且趋于平缓。肌肉ACP活性随着盐度的升高而呈小幅度下降,而肝胰腺ACP活性则呈小幅度升高。不同胁迫时间同一盐度组肌肉ACP活性有升有降;肌肉、肝胰腺AKP活性随着盐度升高而升高;随着胁迫时间延长,同一盐度组肌肉AKP活性均呈升高趋势,肝胰腺AKP活性有升有降。综上所述,环境因子胁迫会影响拟穴青蟹的生理生化及其免疫力。控制氨氮、亚硝酸盐、pH和盐度在一定范围内,有助于维持拟穴青蟹机体正常代谢与健康。