论文部分内容阅读
乳酸链球菌素(Nisin)是一种由部分乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)或乳酸链球菌(Streptococcus uberis)菌株产生的一种阳离子多肽,能够有效抑制大多数革兰氏阳性细菌的生长,并已经作为GRAS产品得到全世界80多个国家和地区的认可。众多Nisin生产企业的涌现,极大满足了Nisin的市场需要。Nisin生物效价的准确定量是保证Nisin产品质量的关键要素之一,所以本论文以此为研究对象展开分析,讨论影响不同Nisin效价检测方法检测结果的主要因素。本研究的目的是为Nisin生产厂家开发出一套适合实时、准确监测Nisin效价的检测方法组合,并对Nisin的生产提供检测依据和技术指导。在使用琼脂扩散法检测Nisin效价时,采用pH=2.5盐酸溶液溶解Nisin标准品,并在培养基中添加1.3%或1.4%的琼脂,分别检测Nisin A或Nisin Z,调整培养基中指示菌浓度控制在1.0×106 CFU/mL,经过渗透扩散2.5 h之后再进行培养的方式,可得到的标准品效价(1000±50 IU/mg)。在使用高效液相色谱(HPLC)法检测时,选用安捷伦生产的1220型色谱,4.6 mm×150 mm的反向C18色谱柱,流动相组成为29%乙腈、0.4‰三氟乙酸的水溶液,可以得到理想的检测图谱。而在使用微生物浊度法检测时,在检测体系中添加OD600值为0.125的指示菌悬液及0.125%的刃天青,并置于23℃的培养环境中培养,可以得到最佳的梯度显色结果,最后放在酶标仪中用595 nm滤光片检测得到的检测结果更加接近琼脂扩散法的检测结果。结果表明,(1)使用琼脂扩散法检测Nisin时,标准品Nisin(Nisin A和Nisin Z)类型的选用,是最重要的并且被忽视的影响因素。在对Nisin A样品进行检测时需要使用与之相对应的Nisin A标准品进行对标检测使用。同样,在对Nisin Z样品进行检测时需要使用与之相对应的Nisin Z标准品进行对标检测使用。(2)使用HPLC法检测Nisin效价的趋势与琼脂扩散法检测Nisin效价的趋势一致,但是在检测过程表现出结果偏高的现象。而不同来源的Nisin样品在进行HPLC法检测时,进样量大小的控制对检测结果的准确性影响显著。效价范围为10003000 IU/mg的Nisin样品时,进样量为20μL;500010000 IU/mg样品的进样量为10μL;10000100000 IU/mg样品的进样量为5μL。(3)微生物浊度法的反应体系中刃天青溶液浓度对检测结果的影响显著,刃天青水溶液的浓度为0.125%时,可得到最佳的检测结果。此方法可以为Nisin成品效价进行预判,提高琼脂扩散法检测Nisin成品的效率。三种方法贯穿Nisin的整个生产环节,相互配合使用可以达到全面精准监控Nisin生产的目的。