植物病毒病分布范围广、流行速度快、危害严重、防控困难,素有“植物癌症”之称。由于化学药剂的过度使用,导致环境不堪重负,人们更侧重于采用绿色生物防治手段防治植物病毒病。本研究针对对烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）具有抑制作用的菌株B55的分类鉴定、全基因组分析、发酵条件的优化、抗病毒活性物质分析和抗病毒作用机理开展系统研究,为抗病毒微生物农药的研发提供可利用资源和理论依据。本研究取得了以下结果:1.菌株B55分类鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。对菌株B55进行了形态学、主要生理生化特性测定和16S r DNA分子鉴定,结果表明菌株B55革兰氏阳性,菌体杆状,能够产生芽孢,芽孢椭圆形,中生、孢囊膨大,菌落形状不规则,表面有褶皱,具有多种活性,16S r DNA序列同源性分析结果表明菌株B55与贝莱斯芽孢杆菌同源性较高,达100%,结合形态学和生理生化特性测定,将其鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。2.对贝莱斯芽孢杆菌B55进行了全基因组分析。全基因组测序分析得出菌株B55的基因总数量4018个,基因组序列总长为3929772 bp,平均GC含量46.5%,含有27个r RNA,86个t RNA,70个串联重复序列,1个基因组岛,1个前噬菌体。对其代谢系统进行分析,注释到与多种碳水化合物活性酶相关基因,检测到12个与次级代谢产物合成相关的基因簇,COG、GO、KEGG注释到与多种功能基因。3.优化了贝莱斯芽孢杆菌B55的发酵条件。从三种营养条件和四种环境条件两方面进行优化,通过单因素试验确定几种供试碳源、氮源和无机盐组分中各自的最佳物质,通过Box-Behnken响应面法进行配比优化,确定最佳配方为可溶性淀粉5 g,蛋白胨5g,硫酸锌15 g,蒸馏水1000 m L。根据优化培养基,对p H、温度、时间和转速四种环境条件进行筛选,确定p H为5,28℃,180 r/min发酵48 h为最优发酵方案。抑制效果明显优于优化前的发酵液,活性物质的产率提高了25%。4.对贝莱斯芽孢杆菌B55的抗病毒活性物质进行分析,表明为生物表面活性素。经酸沉淀获得淡黄色活性粗提物,经Sephadex LH-20柱层析精制后薄层层析,在365 nm紫外光照射下有荧光条带,喷施茚三酮后不显色,加热后出现淡紫色条带。该活性物质的表面张力接近于纯品表面活性素。具有良好的排油活性和一定的耐热性,120℃处理30 min后仍具有活性。综合试验分析,初步判断该活性物质为生物表面活性素。表面活性素对蜡状芽孢杆菌具有抑制作用,当浓度为25μg/m L时仍具有抑制效果。当生物表面活性素的浓度为200μg/m L时,对TMV的病斑抑制率为69.4%,对TMV的预防作用防效为54.2%,治疗作用防效达32.4%,并且能够促进番茄幼苗的生长。5.对表面活性素的抗TMV作用机理进行了初步探究。将200μg/m L的表面活性素与TMV粒子等量混合,采用负染法通过透射电镜观察TMV粒子形态,结果表明表面活性素对TMV粒子形态不产生影响,通过实时荧光定量PCR对TMV的积累量进行测定,结果表明表面活性素能够使TMV的积累量下调,抑制TMV在烟草内部复制增殖;对几种烟草相关防御基因的表达量进行测定,结果表明表面活性素能够诱导COIL、NPR1、PAL、PDF1.2和PR1a等相关防御基因的表达,相关防御基因表达量均高于对照组,其中NPR1基因表达量在处理的5 d内逐渐上调,第5 d时表达量为对照的17倍,说明表面活性素通过水杨酸信号途径诱导植物系统产生抗病性,从而抵抗TMV的侵染。