昆虫杆状病毒是一类特异性侵染并广泛存在于鳞翅类昆虫的双链DNA病毒,其基因组中普遍含有一类凋亡抑制基因(inhibitor of apoptosis,iap)。目前部分iap基因的抑制凋亡功能已得到证实,但随着对昆虫杆状病毒基因功能研究的深入,发现不同病毒来源的iap基因的生物学功能均有差异,部分iap基因的抑制细胞凋亡功能不明显,甚至在一些研究中发现iap基因家族中的成员呈现出完全相反的生物学功能。此外,iop基因本身的转录调控机制也尚未可知。目前,家蚕杆状病毒BmNPV基因组中的iap2基因凋亡抑制功能已经得到广泛证实,因此,在本研究中,以iap2基因为研究对象。首先通过酵母单杂交系统筛选能与iap2启动子互作的结合蛋白因子,共筛选出来13种互作蛋白,然后根据前人的研究和生物信息学分析结果将其分为宿主来源基因和病毒来源和功能未知基因。根据各个基因的研究现状,从上述互作蛋白因子编码基因中选择lef-6和bro-d基因进行更深入的研究。利用Red重组技术分别构建了lef-6基因和bro-d基因缺失型病毒,利用荧光定量qRT-PCR检测基因缺失对病毒复制及转录的影响。结果显示:lef-6和bro-d基因缺失后不仅iap2基因转录水平显著下调(p<0.05),对病毒基因组的复制水平也均有显著影响(p<0.05),早期基因lef-3、晚期基因vp39、极晚期基因pl0转录水平也均会下降(p<0.05)。此外,为了检测lef-6和bro-d基因缺失后病毒对宿主细胞的影响,利用MTT(噻唑蓝)法和Western blot检测分析了转染lef-6或bro-d基因缺失型病毒的细胞活力和细胞凋亡变化情况。结果显示,尽管lef-6和bro-d缺失后将导致病毒基因组复制和转录明显低于野生型病毒,但转染细胞后仍然会导致细胞活力显著降低,并激活细胞线粒体凋亡内源信号通路,促进细胞凋亡。综上所述,可知lef-6和bro-d基因对病毒基因组的复制转录均有促进作用,但不是病毒复制转录的必需基因;lef-6和bro-d基因缺失均会引起宿主细胞凋亡程度加深,且很有可能是通过调控iap2基因的表达进而参与调控宿主细胞线粒体凋亡信号通路。