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研究目的： 了解抑制GSK3β对体外诱导分化M1型Mψψ表型的影响及机制并探讨GSK3β抑制剂(TDZD-8)对叶酸肾损伤模型小鼠肾脏Mψψ表型的影响和肾脏损伤的保护作用。研究方法：体外培养骨髓细胞,在脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和Y-干扰素(intertferon-gamma, IFNy)作用下转化为M1型Mψψ。分别使用不同浓度糖原合成酶激酶3β (glycogen synthase kinase 3β, GSK3β)抑制剂TDZD-8(0,1,2.5,5μM)和氯化锂(Lithium Choloride, LiCl)、SiRNA干扰技术抑制GSK3β,通过免疫荧光、蛋白印迹以及流式细胞等方法检测Mψψ表面标志物如M1标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和白介素-1β (interleukin-1 beta,IL-1p)和M2标志物精氨酸酶I (arginase I, Arg I)和甘露糖受体(mannose receptor, MR)表达的变化情况,以及该过程中细胞信号传导及转录激活因子(signal transducers and activators of transcription, STAT)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR-γ)活性的变化。并通过使用相应STAT、PPARγ的激活剂／抑制剂探讨GSK3β抑制剂诱导Mψψ表型变化的潜在机制。在急性肾损伤叶酸动物模型中应用GSK3β抑制剂TDZD-8,采用前处理(TDZD-pre,叶酸注射前30分钟单次给药)和后处理(TDZD-post,在叶酸注射后第5天单次给药),观察各组小鼠肾功能指标变化情况,并在第7天观察肾脏损伤以及组织内Mψψ的表型,以及在第28天时肾脏组织纤维化的程度。研究结果： 体外研究发现,骨髓细胞培养诱导分化的Ml型Mψψ在不同浓度TDZD-8作用48小时后,细胞表达iNOS和IL-1β显著下降,而ArgI和MR受体表达显著上升,这种作用在TDZD-80-5μM浓度区间呈剂量依赖。免疫荧光检测显示在TDZD-8作用下,M1型Mψψ表达iNOS显著下降,流式细胞仪检测表明TDZD-8使M1型Mψψ表达MR显著上升。使用SiRNA干扰技术发敲低GSK3β表达后M1型Mφ表达ArgⅠ和MR显著上升。M1型Mφ在5μM TDZD-8干预下,细胞pSTAT1, pSTAT6的表达在120分钟内无显著变化,pSTAT3的表达呈时间依赖下降。 使用STAT3特异性抑制剂(stattic)对M1型Mφ进行干预,M1型Mφ表达M2标志物(ArgⅠ和MR)无显著上调。M1型Mφ在TDZD-8干预下,细胞抑制性磷酸化PPARy (pPPARy)表达显著下调。使用PPARy抑制剂(GW6229)和TDZD-8对M1型Mφ共处理后,TDZD-8诱导的M2标志物(ArgⅠ和MR)表达的上调能被显著抑制。体内对叶酸肾损伤模型的研究发现,在损伤早期,小鼠肾脏小管间质呈现典型的急性肾损伤的特点,血清肌酐(serum creatinine, Scr)显著上升。急性期过后,尽管Scr逐渐下降,但肾脏组织逐渐出现慢性化病变,在28天后肾脏组织有明显的胶原Ⅰ和纤维连接蛋白沉积。在损伤前预防性给予(前处理)或在损伤后第5天给予(后处理)TDZD-8均可显著减轻第7天时肾脏的损伤,并减轻第28天时肾脏的纤维化。前处理后肾脏组织中细胞凋亡(TUNEL)显著减少,细胞增生、修复(Ki-67, PAX 2)等指标表达显著上升,组织中M2型Mφ比例无显著上调(TDZD-pre:FA:26.8±12.4 vs 17.4±5.7, P>0.05)。后处理中,组织也表现为细胞凋亡(TUNEL)的减少,细胞增生、修复(Ki-67, PAX 2)等指标表达的上调,但程度显著弱于前处理组(P<0.05)。后处理中组织中M2型Mφ比例显著高于前处理组(TDZD-pre:TDZD-post:26.8±12.4 vs 85.7±9.3, P<0.01)。研究结论：抑制GSK3β可诱导M1型Mφ向M2转化。后处理中使用GSK3β抑制剂TDZD-8具有诱导叶酸肾脏损伤模型肾脏组中Mφ向M2转化的作用,并减轻肾脏的纤维化,这一作用至少部分依赖于PPAR-γ通路实现。以上结果提示,GSK3β可作为潜在急性肾损伤的干预靶点改善肾脏的远期预后。