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目的(1)研究红景天苷对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用； (2)抑制补体系统激活对红景天苷保护作用的影响,从分子生物学水平阐明红景天菅脑保护作用的部分机理。方法(1)健康成年雄性SD大鼠63只,适应性喂养1周,随机分为假手术组(sham组)21只和造模组42只；造模组采用线栓法制作大鼠大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,2h后再灌注,即为MCAO模型大鼠；造模成功后,抽签法随机分为MCAO模型对照组(MCAO组)21只、红景天苷给药组(MCAO+Sal组)21只。于造模1h后,对sham组和MCAO组大鼠腹腔注射0.9%生理盐水(10ml·kg-1·d-1), MCAO+Sal组腹腔注射红景天苷(50mg·kg-1·d-1),连续给药6d。Zea-Longa法对大鼠神经功能损伤评分；焦油紫染色法对神经细胞尼氏(Nissl)小体染色；基因芯片方法分析脑组织基因表达图谱；RT-qPCR技术检测大鼠缺血侧脑组织Egr1、Egr2、Egr4、Arc等mRNA表达水平；Western blot技术检测大鼠缺血侧脑组织cleaved Caspase-3、Egr1、Egr2,Egr41 Arc、NogoA、NgR、BDNF、NGF、Bax、Bcl-xl蛋白表达水平；免疫荧光技术检测大鼠缺血侧脑组织细胞凋亡情况。(2)健康成年雄性SD大鼠36只,适应性喂养1周,随机分为假手术组(sham组)12只和造模组24只；线栓法制作MCAO模型大鼠,2h后再灌注,即为MCAO模型大鼠；造模成功后,抽签法随机分为MCAO模型对照组(MCAO组)12只、红景天苷给药组(MCAO+Sal组)12只。于造模48h后,对sham组和MCAO组大鼠腹腔注射O.9%生理盐水(10ml·kg-1·d-1), MCAO+Sal组腹腔注射红景天苷(50mg·kg-1·d-1),连续给药6d。Zea-Longa法对大鼠神经功能损伤评分,焦油紫染色法对神经细胞内尼氏(Nissl)小体染色；RT-qPCR技术检测大鼠缺血侧脑组织Egr1、Egr2、Egr4、Arc mRNA表达水平；Western blot技术检测大鼠缺血侧脑组织Egr1、Egr2、Egr4、Arc蛋白表达水平。(3)用200μMCoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型,实验分为空白对照组(N组)、模型对照组(C组)、模型+红景天苷0.1μM剂量组(0.1μMSal组,即红景天苷终浓度为0.1 μ M)、模型+红景天苷1μM剂量组(1μMSal组,即红景天苷终浓度为1 μM)、模型十红景天苷10μM剂量组(10μMSal组,即红景天苷终浓度为10 μM),给药48h后,收集细胞,检测细胞中Caspase-3活性的变化,Egr4、Egrl蛋白表达。之后用siRNA干扰Egr4的表达,实验分为空白对照组(N组)、模型对照组(C组)、模型+siRNA阴性对照组(NC组)、模型+红景天苷组(Sal组,即红景天苷终浓度为1 μ M)、模型+Egr4 siRNA组(Egr4 siRNA组,即Egr4 siRNA终浓度为50nM)、模型+Egr4 siRNA+红景天苷组(Egr4siRNA+Sal组)；siRNA干扰6h后,更换新的培养液,给予红景天苷,细胞继续培养48h后,收集样品,检测Egr4 mRNA表达,Egr4、BaX、Bcl-xl蛋白表达及Caspase-3活性。(4)健康成年雄性SD大鼠72只,适应性喂养1周,随机分为假手术组(sham组)24只和造模组48只；造模组采用线栓法制作MCAO模型大鼠,2h后再灌注,即为MCAO模型大鼠；造模成功后,抽签法随机分为MCAO模型对照组(MCAO组)24只、红景天苷给药组(MCAO+Sal组)24只。于造模1h后,对sham组和MCAO组大鼠腹腔注射0.9%生理盐水(10 ml·kg-1·d-1), MCAO+Sal组腹腔注射红景天苷(50mg·kg-1·d-1)分别连续给药1d和2d；同时,6d的动物样品选用第一部分实验样品。免疫荧光技术检测1d、2d和6d大鼠缺血侧脑组织Neun、VEGF、IgM、Annexin Ⅳ、C3和MBL-2的表达,RT-qPCR技术检测大鼠缺血侧脑组织Egr4、Arc、Clqa mRNA的表达,Western blot技术检测大鼠缺血侧脑组织Neun、C3、C3a、Egr4及Arc等蛋白表达。(5)健康成年雄性SD大鼠72只,适应性喂养1周,随机分为侧脑室注射人工脑脊液36只,侧脑室注射C3ar拮抗剂36只(C3ar拈抗剂注射量为lmg·kg-1),30 min后制作MCAO模型,2h后再灌注,即为MCAO模型大鼠；实验分为6组,即人工脑脊液+假手术组(sham组),C3ar拈抗剂+假手术组(sham+C3ar组),人工脑脊液+MCAO模型组(MCAO组)C3a拮抗剂+MCAO模型组(MCAO+C3ar组),人工脑脊液+MCAO+红景天苷组(MCAO+Sal组),C3ar拮抗齐0+MCAO+红景天苷组(MCAO+C3ar+Sal组),于造模1h后,对sham组、sham+C3ar组、MCAO组和MCAO+C3ar组腹腔注射0.9%生理盐水(10ml·kg-1·d-1), MCAO+Sal组和MCAO+C3ar+Sal组腹腔注射红景天苷(50mg·kg-1·d-1),分别给药1d和2d,且每天侧脑室注射1次,取大鼠缺血侧脑组织检测IL-6、Neun、Egrl、Egr2,Egr4、Arc mRNA及蛋白表达水平,以及NF-K Bp50核蛋白水平结果(1) MCAO模型大鼠造模1h后,连续6d腹腔注射红景天苷,脑梗死体积明显降低,神经功能评分升高,Nissl阳性细胞数量增加,神经细胞凋亡数量减少, Western blot分析结果表明红景天苷降低cleaved Caspase-3的蛋白表达,但对总的Caspase-3的表达没有影响,能够抑制线粒体Bax蛋白,促进Bcl-xl蛋白的表达,及促进BDNF、NGF蛋白,抑制NogoA、NgR蛋白表达。基因芯片方法分析脑组织基因表达图谱,显示红景天苷能逆转缺氧—再灌注所引起的基因表达的变化,并采用RT-qPCR和Western blot技术得到进一步验证。(2) MCAO模型大鼠造模48h后,连续6d腹腔注射红景天苷,能有效减少脑梗死体积,改善神经功能损伤,促进Egrl、Egr2、Egr4、Arc基因及蛋白表达。(3)红景天苷能够抑制PC12细胞损伤模型Caspase-3活性,促进Egr4、Egrl蛋白表达。siRNA干扰Egr4表达后,Egr4表达降低,Caspase-3活性升高,Bax蛋白增加,Bcl-xl蛋白降低,经红景天苷作用后能逆转Egr4 siRNA所引起的基因表达的变化。(4)免疫荧光染色显示,IgM, Annexin IV和MBL-2在MCAO模型大鼠缺血区域血管内皮中表达,补体成分C3不仅在内皮细胞中有表达,且在神经细胞中也有表达。MCAO模型大鼠,经红景天苷分别作用1d、2d、6d后,能够降低IgM,C3、Annexin IV和MBL-2的表达,促进NeuN表达,表明红景天苷能够抑制补体MBL途径。MCAO模型大鼠造模1d后,补体经典途径主要成分Clqa和转录因子Egr4、Arc没有变化；造模2d后Clqa表达升高,Egr4、Arc表达降低,经红景天苷作用后,能够逆转Clqa、Egr4、Arc的表达,表明红景天苷对补体经典途径的抑制作用是在2d后,同时对Egr4、Arc的促进作用是发生在抑制补体成分C3之后。(5)连续2d对MCAO模型大鼠侧脑室注射C3aR拮抗剂后,能够抑制IL-6 mRNA及核蛋白p50的表达,促进NeuN和Egrs的表达,其作用与红景天苷一致,且红景天苷与C3ar拮抗剂联合作用并没有明显的叠加作用。同时,对MCAO模型大鼠侧脑室注射C3ar拮抗剂1d后,能够抑制IL-6 mRNA及核蛋白p50的表达,促进NeuN表达,但对Egrs作用不明显,其作用与红景天苷一致,结论(1)红景天苷能够降低MCAO模型大鼠梗死体积,改善神经功能损伤,抑制神经细胞凋亡,能够逆转缺氧一再灌注所引起的基因表达的变化,具有神经保护作用,且具有宽的治疗时间窗。(2)红景天苷能促进Egr4的表达,进而抑制细胞凋亡,对神经细胞具有保护作用。(3)红景天苷对MCAO模型大鼠具有神经保护作用,其部分作用机制是红景天苷通过补体MBL途径和补体经典途径抑制MCAO模型大鼠急性期和亚急性期补体系统激活,调控Egrs,进而减少神经细胞死亡。