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背景与目的随着老龄化社会的出现,器官衰老日益受到重视。卵巢衰老所引发的围绝经期症状和诸多老年性疾病严重影响女性的健康。前期探索c-FLIP在宫颈腺癌中的作用中成功建立了一系列分子生物学技术平台。应用已有的肿瘤分子生物学技术平台探索卵巢衰老的内在机制,筛选卵巢衰老过程中的差异表达基因,并分析靶基因在卵泡发育、卵巢功能中的作用。方法激光捕获显微切割技术(Laser Capture Microdissection, LCM)获取卵巢组织中的单个卵泡；提取微量RNA并进行线性扩增；所获得的RNA与Affymetrix GeneChip Mouse Genome 430 2.0 Array杂交并扫描。采用免疫组织化学方法、实时定量聚合酶链反应(Real Time Polymerase Chain Reaction, Real Time PCR)及Weston Blot检测靶基因的表达定位及丰度。应用RNA干扰技术、单克隆抗体特异性封闭靶基因,下调其在组织、细胞中的表达。MTT比色法、流式细胞技术FCS分析下调靶基因对细胞增殖、凋亡的影响；激光共聚焦显微镜、电镜分别观察细胞的大小、形态学及超微结构变化。酶联荧光分析(Enzyme Linked Fluorescence Analysis, ELFA)检测激素表达水平改变。Real Time-PCR及Weston Blot检测相关基因的表达水平改变,探讨基因的相互调节。结果(1)下调cFLIP影响caspase-8蛋白的表达,从而阻抑宫颈腺癌Hela细胞增殖并诱导其凋亡；并且能有效提高Hela细胞对放、化疗的敏感性。(2)LCM获取的卵泡提取RNA经线性扩增后获得的aRNA与表达谱芯片杂交,筛选得到卵巢衰老差异表达基因共334条。(3)其中898-a基因在卵泡中特异性表达,其表达水平随小鼠的发育而降低。下调898-a基因表达,卵泡生长直径变小,卵巢激素分泌水平升高,颗粒细胞体外培养其增殖与激素分泌无明显改变；卵母细胞形态异常,超微结构显著破坏,颗粒细胞无显著改变,透明带呈致密板状,其上突触破坏消失。898-a表达下调,卵母细胞特异性表达基因表达水平升高；甾体激素合成酶类基因及LHR表达显著升高,卵母-颗粒细胞缝隙连接表达下降,颗粒-颗粒细胞缝隙连接表达升高。(4) PRLR表达水平随小鼠不断发育而显著性升高,卵泡募集选择过程中PRLR表达水平上升,排卵过程中表达水平有所下降,但仍高于对照组,黄体形成时期其表达水平再次升高。结论(1)cFLIP对宫颈腺癌生物学行为有重要影响,可能成为宫颈腺癌新的治疗靶点。(2)利用肿瘤分子生物学技术平台成功获得卵巢衰老关键基因并分析其作用机制。(3)LCM联合表达谱芯片是一条可行有效的筛选差异表达基因的技术路线。(4)下调898-a基因抑制卵母细胞的功能,致使颗粒细胞异常分化成熟,可能与卵巢衰老过程卵泡消耗加速相关。(5) PRLR通过调节卵泡细胞的增殖影响小鼠卵泡的募集与发育,并且与黄体的形成和功能维持可能有关。