目的：　　1.探索神经干细胞（Neural stem cells，NSCs）体外培养的条件、生长规律及形态特点，掌握体外条件下NSCs的分离、培养及传代。　　2.研究不同生物硅胶膜对NSCs增殖与分化的影响，建立大鼠神经干细胞在硅胶膜上增殖及分化的方法体系。　　3.初步探索仿生脉冲载荷对NSCs增殖与分化的影响，研究力学因素对NSCs生长及分化的影响。　　方法：　　1.孕SD大鼠，14-16 d，常规麻醉，无菌条件下提取NSCs，在含有各种神经生长因子的DMEM培养基中培养，观察NSCs生长状况并拍照记录。定期传代及诱导分化。免疫荧光染色对第三代NSCs进行鉴定。　　2.体外条件下将NSCs接种到不同弹性模量生物硅胶膜，实验分3组：对照组（普通培养皿）、A组（生物硅胶膜1）、B组（生物硅胶膜2），选取第三代NSCs，以同样的细胞密度分别接种，培养在DMEM／F12（10％FBS）培养基，至细胞贴壁后更换为DMEM／F12培养基，并加入神经生长因子，每日观察细胞生长状态，隔天换液，并行免疫荧光染色和流式细胞定量检测，行统计学分析。　　3.本实验分2组，实验组：生物硅胶膜2培养+力学加载组；对照组：单纯生物硅胶膜培养组，均接种第三代的NSCs，培养条件相同。每日观察细胞生长状态及形态变化，并行免疫荧光染色和流式细胞定量检测，行统计学分析。　　结果：　　1.第一实验：悬浮培养到第三代的NSCs免疫荧光结果示，镜下可见巢蛋白（Nestin）阳性；贴壁分化后的神经细胞的免疫荧光检测示，镜下可见神经元特异性烯醇化酶（NSE）、星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白（MBP）阳性细胞。　　2.第二实验：各组NSCs均可贴壁，呈神经球样生长，有轴突伸出，B组细胞贴壁情况和透光度优于 A组；培养7 d后，免疫荧光结果示，各组细胞镜下均可见 NSE、GFAP及MBP阳性细胞；流式细胞定量检测结果示，3组NSCs向星形胶质细胞分化的比例：对照组（33%±2.55%）；A组（36.1%±1.85%）；B组（93.23%±2.62%），组间比较（P＜0.05）有统计学意义。　　3.第三实验：免疫荧光检测示，两组细胞均大部分向星形胶质细胞分化；流式细胞定量检测两组细胞分化为星形胶质细胞的比例示：对照组（93.23%±2.62%）；实验组（91.60%±3.92%），组间比较无统计学意义（P＞0.05）。形态学检测示：轴突数量：对照组（9±3），实验组（22±7），组间比较有统计学意义（P＜0.05）；轴突长度：对照组（144±46.5）μm，实验组（298±102.4）μm，组间比较有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1.提取的大鼠胚胎NSCs可在体外悬浮培养、增值和传代，贴壁后可分化为神经元和神经胶质细胞。　　2.两种硅胶膜均可作为NSCs培养的良好载体，对NSCs的存活、增殖无毒副作用；硅胶膜的弹性模量不同对NSCs的分化有影响。美国SMI公司的生物硅胶膜厚度均一，透光度高，贴壁生长状况良好。　　3.0.2Hz87.5 Pa的脉冲载荷未能诱导NSCs定向分化，但可对NSCs生长过程中的形态变化产生影响，使其轴突变长且数量增加。