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背景:嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immuno-therapy,CAR)是一种人工合成的新型受体,以肿瘤特异性单克隆抗体的单链可变区(single chain variable fragment,scFv)取代T细胞受体(T cell receptor,TCR)的α和β链可变区,并将scFv和共刺激分子(如CD28和4-1BB等)以及T细胞信号传导区域CD3ζ连接形成的。嵌合抗原受体T细胞免疫治疗(CAR-T)在血液系统肿瘤疾病中取得了显著的效果,被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。动态监测患者体内CAR-T细胞的数量可以提供关于患者病情变化更详细的信息,并预测CAR-T治疗的临床有效性。因此有必要开发一种精确、简便的检测CAR-T细胞数量的方法。目的:本研究目的是希望基于TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)开发一种检测外周血中CAR-T细胞的方法,用于患者CAR-T治疗后外周血中CAR-T细胞数量的监测。材料和方法:基于TaqMan实时荧光定量PCR方法分别检测特异性的CAR-T细胞基因CAR和持家基因GAPDH含量,以此计算CAR-T的细胞数量和在外周血有核细胞的占比。具体步骤包括提取外周血细胞基因组DNA,使用如下引物和探针,正向引物序列:GGATTCGCCAGCCTCCAC,反向引物序列:AAACTTGGCTCTTGGAGTTGT和探针序列:(FAM)-TCCCAGCCACTCCAG ACCCTT-(MGB)在ABI VII7荧光定量PCR仪上进行如下反应,40个循环的95℃变性30秒和60℃退火30秒,期间测量荧光。结果:我们建立的检测方法在1.2×10~1拷贝/μl至1.2×10~7拷贝/μl范围内,相关系数达0.999的线性关系(y=-3.3682x+38.594,R~2=0.999)。重复性测试显示变异系数不高于1.65%。说明该检测方法灵敏度高、重复性好,可用于检测外周血样本中的CAR-T细胞。讨论:我们开发的TaqMan实时荧光定量PCR是一种可用于检测外周血中CAR-T细胞的方法,并且具有高度敏感、高特异性和可重复性的优点。背景:在前期研究中进行全基因组表达谱检测发现在雄激素受体(Androgen Receptor,Ar)基因睾丸支持细胞特异性敲除小鼠(S-Ar-/y)睾丸组织中干扰素刺激因子15(Interferon-Stimulated Gene 15,Isg15)基因表达增高。目的:确认睾丸组织中支持细胞雄激素及其受体对Isg15基因表达的影响。方法:采用RT-q PCR和western印迹等方法比较野生型小鼠和S-Ar-/y小鼠睾丸组织中Isg15基因表达量。通过免疫组织化学和荧光染色两种方法检测Isg15蛋白在睾丸组织中的分布。结果:在S-Ar-/y小鼠睾丸组织中Isg15基因表达量比在野生型小鼠中显著升高,Isg15蛋白主要表达于精母细胞。结论:小鼠睾丸组织支持细胞中的雄激素及其受体信号可以抑制精母细胞中干扰素刺激因子15基因的表达。