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全球每年因为线虫使经济作物减产而造成的经济损失重大,食线虫真菌是线虫的自然天敌,因种类多分布广而受到广泛关注。少孢节丛孢是捕食线虫真菌的模式种,它在形成三维菌网后捕杀线虫,因此捕食器官的形成对其生活史的转变非常重要。很多因素都被报道能诱导少孢节丛孢产生捕食器官,如线虫、线虫提取液、细菌、氨基酸、小肽等。文献及我们的前期研究表明在线虫提取液诱导少孢节丛孢形成捕食器官过程中产生了氨,暗示氨气参与了捕食器官的形成。在其他一些致病真菌中报道致病菌的形态发生变化的过程中分泌氨,且结果显示氨与该真菌的形态变化和致病性相关。文献报道与氨相关的基因有AreA、Mep、PacC、GDH2、GS1、amet等基因,其中GDH2基因(编码谷氨酸脱氢酶)和GS1基因(编码谷氨酰胺合成酶)与氨的产生相关,amet基因(编码氨转运蛋白)与氨的分泌有关。本文研究GDH2、GS1、amet三个基因在线虫提取液(NE)诱导少孢节孢分泌氨和产捕食器官中的作用。用同源重组方法敲除GDH2、GS1、amet三个基因,只得到△GDH2敲除株。我们比较了少孢节丛孢的野生型(WT)和△GDH2敲除株在NE诱导条件下产捕食器官数量、pH荧光染色、捕杀线虫能力、产孢形态和数量、生长速率、抗逆性生长、HPLC代谢产物等方面的差异。实验结果显示△GDH2敲除株比WT产捕食器官能力下降90%,且分泌到培养基中的氨浓度也降低了50%,当加入外源氨之后,捕食器官的数量恢复13%,结果暗示了NE与少孢节丛孢共培养时产生的氨与少孢节丛孢捕食器官的形成有一定的关联。用pH荧光染色剂BCECF/AM对菌丝染色后,荧光显微镜检测发现,△GDH2敲除株的菌丝内的荧光比WT的暗,说明△GDH2敲除株的菌丝内pH比WT的低,结果暗示菌丝内的碱化与捕食器官的形成可能有关系。与WT相比,△GDH2敲除株的产孢能力下降了66.4%,结果表明GDH2基因在产孢子过程中可能发挥重要作用。△GDH2敲除株与WT在生长速率、捕杀线虫能力方面均无差异。在含有0.01%SDS、0.02%SDS、0.1 M NaCl、0.2 M NaCl、5 mM H2O2、10 mM H2O2、15 mM H2O2的培养基中WT和△GDH2敲除株抗逆性没有差异,但在0.03%SDS、0.3 M NaCl的培养基中,△GDH2敲除株的抗逆性较WT减弱。经HPLC检测△GDH2敲除株与WT的代谢产物,实验结果表明存在明显差异,结果暗示GDH2基因在少孢节丛孢代谢过程中起着一定作用。文献报道少孢节丛孢能分泌挥发性物质吸引线虫,从而增加捕杀线虫的机率。我们用琼脂糖凝胶平板法进行氨水诱吸秀丽隐杆线虫实验,实验结果表明氨水浓度在10-8和10-2之间均可吸引秀丽隐杆线虫(吸引指数>0.2),结果表明氨可以吸引秀丽隐杆线虫。本文的创新点:1.结果暗示GDH2基因在NE诱导少孢节丛孢产氨、产捕食器官以及产孢过程中起着重要作用。2.证实了氨可以吸引线虫,可能可以增加少孢节丛孢捕杀线虫的能力。