目的：(1).探讨不同浓度苦参碱对人胃癌细胞株NCI-N87体外增殖、细胞周期、细胞凋亡作用及bcl-2蛋白表达的影响;(2).检测苦参碱对体外人外周血T淋巴细胞增殖的影响,探讨苦参碱对T淋巴细胞的可能影响情况,以及苦参碱联合T淋巴细胞杀伤胃癌的作用,为临床应用苦参碱治疗胃癌提供理论和实验依据. 方法： 实验Ⅰ.苦参碱对人胃癌细胞株NCI-N87增殖、细胞周期、细胞凋亡和bcl-2蛋白表达的影响: 1.用不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、6.0mg/ml)的苦参碱分别作用于胃癌细胞株NCI-N87 24、48、72h,采用CCK-8法检测药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变; 2.应用流式细胞仪检测不同浓度(0.5、1.0、2.0mg/ml)苦参碱对NCI-N87细胞凋亡率的影响、细胞周期的变化及bcl-2蛋白表达的影响: 实验Ⅱ.苦参碱对人外周血T淋巴细胞增殖的影响及联合T淋巴细胞抗肿瘤作用的实验研究: 1.从人外周血中分离单个核细胞,加细胞因子PHA-L、IL-2、OKT-3诱导其分化,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群.利用CCK-8法检测不同浓度苦参碱对T淋巴细胞增殖的影响程度. 2.用0.5、1.0 mg/ml苦参碱和T淋巴细胞(效靶比20:1)处理胃癌细胞NCI-N87 48和72小时后,利用台盼兰拒染法来评价两者单用及联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用,台盼兰拒染的为活细胞被计数.用ELISA试剂盒测定培养上清液中的IL-2、工FN-γ细胞因子水平. 结果： 实验Ⅰ:1.苦参碱浓度在0.1mg/ml,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用;浓度>3mg/ml,细胞毒作用较大,出现大量悬浮细胞和细胞碎片;浓度在0.5～2.0mg/ml时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用(P<0.01),且呈时间剂量依赖性,光学显微镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变.2.流式细胞仪分析结果显示,苦参碱可以增加胃癌细胞株NCI-N87 G1期细胞所占的百分比,阻止细胞进入S期;细胞凋亡百分率随药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而bcl-2蛋白的表达则随之下降. 实验Ⅱ:1.分离后的外周血单个核细胞,经0KT-3、IL-2、PHA-L刺激后的T淋巴细胞比例为79.2﹪, 1.0、2.0和3.0mg/ml苦参碱对人T淋巴细胞增殖呈抑制作用,而0.1、0.5mg/ml苦参碱对T淋巴细胞增殖起促进作用. 2.0.5、1.Omg/ml苦参碱联合T淋巴细胞与胃癌细胞株NCI-N87在体外共同培养后,可见其显著增强对肿瘤细胞的杀伤作用,肿瘤活细胞数量明显减少(P<0.01),0.5mg/ml苦参碱组培养上清液中IL-2和IFN-Y水平与对照组相比明显升高(P<0.01),1.0mg/ml苦参碱不能增加IL一2和IFN-Y的分泌. 结论： 1.一定浓度苦参碱对人胃癌细胞有明显地抑制作用,并且抑制作用呈时间和剂量依赖性;苦参碱可能是通过将人胃癌细胞周期阻滞在S期,抑制其增殖.并通过下调bcl-2蛋白的表达,诱导人胃癌细胞发生凋亡等,发挥其抗胃癌作用. 2.苦参碱对人外周血T淋巴细胞的增殖呈双向作用;0.5mg/ml浓度苦参碱具有增强T淋巴细胞免疫功能的作用,刺激其分泌大量细胞因子,如IL-2和IFN-γ;因此,两者联合应用时能增强抗肿瘤的作用.