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卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，因生长迅速，早期即可在腹腔内扩散，故五年生存率较低，一般不超过30％。目前临床常用的几种联合化疗方案，虽然有效率有所提高，但仍不理想。因此，探索更有效的腹腔内化疗具有重要的临床意义。近年来，从中草药和天然植物中提取和寻找防治肿瘤的有效成分已成为治疗肿瘤的希望和新途径。染料木黄酮（Genistein）是异黄酮类化合物的主要成分之一，广泛分布在大豆、黄芪、葛根等植物中，具有多种生理及药理活性。研究表明Genistein可抑制多种肿瘤细胞的生长且具有抗癌增敏作用。目前，Genistein被认为是一种很有潜力的肿瘤抑制剂。国内外在白血病、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、大肠癌、淋巴瘤和黑色素瘤等肿瘤中研究较多，在卵巢恶性肿瘤中的研究少有报道，对卵巢浆液性乳头状囊腺癌的作用机制尚缺乏研究。本课题以人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3及其裸鼠移植瘤为研究对象，应用光镜和电镜观察、MTT法、AO/EB荧光双染法、流式细胞术、免疫组织化学、RT-PCR、原位杂交、WesternBlotting等技术，应用细胞培养和微孔滤膜小室联合培养、裸鼠皮下移植瘤侵袭模型等方法，体内与体外实验相结合，观测Genistein对卵巢癌细胞系SKOV3及其裸鼠移植瘤生长与侵袭的抑制作用，并探讨其分子机理，从而为Genistein的临床应用提供实验依据。主要结果与结论如下：重庆医科大学博十学位论文 1.不同浓度（5一40林mo讥）Genistein处理SKOv3 24一72小时或一定浓度（20林mol几）Genistein以不同时间处理sKOv3细胞后，均出现Genistein抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用，且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。20林mol/L Genistein处理细胞后出现细胞增殖活性降低，主要表现为细胞核分裂指数降低，细胞的生长抑制率增加，细胞生长减慢。流式细胞术分析发现，Genistein可使SKOV3细胞周期阻滞于GZ/M期;用药后24一72小时可见明显亚Gl峰。光镜、电镜和AO/EB荧光双染法均观察到用药后凋亡细胞的典型形态学特征。Genistein对SKOV3的生长抑制作用伴随细胞凋亡的产生。体内移植瘤实验结果初步表明，o.4mg/kg Genistein（s.e.）对SKOV:裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用，与对照组相比瘤重降低，肿瘤体积减小，坏死面积显著增加，但对裸鼠体重无明显影响。应用0.4mg瓜9 Genistein（s.c.）与4mg瓜g顺铂（i .v.）联合处理SKOV:细胞及其裸鼠移植瘤，对sKoV3细胞体内外生长有加强抑制作用。!二述结果提示，Genistein可抑制SKOV:细胞及其裸鼠移植瘤的生长，呈剂量与时间依赖性，与顺铂联合应用可加强抑制作用，为Genistein的临床应用提供了实验依据。 2·20 p mol/L Genistein作用sKOV3细胞48小时后，下调sKov3细胞PcNA和cychnB、蛋白表达、上调PZI WAF’/CIP’蛋白及mRNA表达水平;下调SKOV;细胞C一erbB:蛋白及mRNA表达水平和c一Raf- 1 mRNA表达水平，并下调C一Jun和C一Fos蛋白及mRNA表达水平。Genistein可能通过抑制pCNA和CyelinB，的表达、增强SKOV3细胞PZI wAF’/CIPl蛋白及mRNA的表达阻断细胞周期，导致GZ/M期阻重庆医科大学博士学位论文滞作用，抑制癌细胞的增殖。Genistein通过干预EGFR介导的肿瘤信号转导系统上的主要信号分子表达，减弱肿瘤恶性表型，可能是其抑制卵巢癌生长的分子基础。 20 p mol/L Genistein作用SKOV3细胞48小时及0.4mg/kg Genistein作用sKOV3移植瘤后，可上调Bax和Caspases一3蛋白及mRNA表达以及NF一KB（P65）蛋白表达、下调Bel一2蛋白及mRNA表达。Genistein诱导sKov3细胞凋亡可能有多种途径:通过上调Caspases一3表达直接诱导凋亡;通过下调Bcl一2、上调Bax蛋白及mRNA表达，使Bcl一2和Bax的比例发生改变而诱导凋亡;通过抑制NF一KB活化，失去对靶基因转录活性的调节，使Bcl一2表达降低而诱导凋亡;通过抑制c一raf-l激活以抑制Bcl一2磷酸化，使Bd一2表达降低，Bcl一2和Bax的比例发生改变导致凋亡。其中抑制Bcl一2可能是其诱导凋亡的最后通路。 3.体外实验发现20 p mol/L Genistein处理SKOV:细胞3天后，细胞侵袭重建基底膜明显受到抑制，其抑制率（侵袭细胞率）呈剂量效应曲线。40 p mof/L Genistein作用后侵袭至滤膜下表面的细胞数最低。体内实验半定量分析结果表明，对照组SKOv3细胞的体内侵袭程度是随时间延长而呈进行性的，而Genistein处理组可明显阻止侵袭的进程，使肿瘤局限于0级或I级，并明显降低了11级、 Hl级、IV级的侵袭百分比。 4.Genistein对SKOv3细胞的趋化运动有极明显的抑制作用;Genistein可下调SKOV:细胞CD44v6蛋白和mRNA的表达水平Genistein可下调SKOV3细胞MMP一9和MMP一2蛋白及mRNA表达水重庆医科大学博十学位论文平、上调TIMP一l和TIMP一2蛋白及mRNA表达水平;Genistein对SKOV3细胞或其条件培养基诱导的内皮细胞迁移有呈浓度依赖性的抑制作用并下调SKOV3细胞VEGF和bFGF蛋白及mRNA表达水平、上调TGFp一1蛋白及mRNA表达水平。Genistein对SKO姚细胞及其裸鼠移植瘤的抑制侵袭作用与其改变如下侵