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背景类风湿关节炎是一种慢性关节炎症疾病,其发病率占全球人口的1%,慢性滑膜炎和关节损伤、破坏是其主要表现,TNF在类风湿关节炎中是主要的致炎因子。在过表达的TNF转基因小鼠,主要表型就是和人类风湿关节炎很相似的关节表现。尽管抗TNF药物治疗能够明显地降低类风湿关节炎的死亡率和骨质破坏,但是其相关药物价格昂贵,同时仅仅大约有60%的患者对这种药物有反应。在对这种药物没有反应的患者中,往往这种抗TNF药物在患者应用几个月才能发现药物对患者无明显作用而换用另一种抗TNF药物,但是另一种药物可能对此类患者作用仍然见效甚微。因此,弄清TNF是如何引起关节炎症和关节破坏的机制十分必要。目的以“TNF对破骨细胞作用”为主线,由于TNF可以直接或间接地促进破骨细胞形成引起骨量流失,同时TNF也能通过表达NF-k B p100抑制破骨细胞形成,TNF作用于不同破骨细胞前体为主线利用TNF引起关节炎症和关节破坏的反映TNF对破骨细胞分化的双向作用机制。方法首先为特征性地描述TNF诱导的OCPs,RT-PCR方法检测细胞表面标记CD11b、F4/80、Ly6C、CD11c和Gr1的表达,从3月大的野生型(C57B16)小鼠股骨分离出骨髓细胞,细胞培养皿中培养小鼠骨髓细胞分别和MCSF、MCSF~+TNF、MCSF~+RANKL共培养,收集的OCP用抗体染色并流式细胞学分析细胞表面标记物的表达;然后将这三种OCPs分成四类细胞群,进行荧光标记的抗体进行染色,流式细胞学对CD11b~+F4/80~+源性的Ly6C~+Gr1~-和Ly6C~-Gr1~-细胞群进行分类,观察TNF诱导破骨细胞的能力及TNF诱导巨噬细胞表达M1标记物;接下来研究TNF诱导破骨细胞形成过程中RelB的作用,M-OCP、R-OCP和T-OCP形成后分别加入PBS,RANKL,TNF,RANK~+TNF继续分别培养至破骨细胞形成,裂解细胞进行Western-Blot分析RelB和β-actin的表达水平;最后研究RelB在破骨细胞形成中的双向作用,C57B16小鼠骨髓细胞培养,然后处理于1/4量的p MX-GFP或者p MX-GFP-RelB逆转录酶病毒,GFP~+F4/80~+细胞利用流式细胞仪分析,GFP和RelB表达的细胞分别加入PBS、RANKL和TNF,Western-Blot分析RelB的表达水平,同时利用RT-PCR分析NFATc1的m RNA表达。结果1.TNF转化M-CSF诱导的Ly6C~-Gr1~-M2至Ly6C~+Gr1~-CD11c~+和Ly6C~-Gr1~-CD11c~+炎性的M1巨噬细胞。2.和M-CSF诱导的巨噬细胞比较,TNF诱导的CD11b~+F4/80~+Ly6C~+Gr1~-和CD11b~+F4/80~+Ly6C~-Gr1~-CD11c~+巨噬细胞有更高形成破骨细胞的潜能。3.Ly Ly6C~+Gr1~-细胞表达M1巨噬细胞,T-OCP源性的Ly6C~-Gr1~-细胞同样可分化至M1巨噬细胞。4.TNF诱导RelB促进Ly Ly6C~+Gr1~-和Ly Ly6C~-Gr1~-巨噬细胞的分化。5.TNF抑制RANKL诱导M-CSF源性的OCP形成破骨细胞,但不能抑制RANKL,TNF源性的OCP形成破骨细胞。6.RelB在影响破骨细胞形成的双相作用。结论1.TNF诱导RelB通过抑制NFATc1活性直接介导NFATc1依赖性的破骨细胞分化和抑制RANKL所诱导的破骨细胞生成。2.TNF通过转化M-CSF诱导的M2分化至M1巨噬细胞增加破骨细胞前体数量,有效地降解RelB能够抑制TNF诱导的M2/M1转化和减少破骨细胞形成。