冬瓜核心种质的构建

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冬瓜(Benincasa hispida Cogn.)和节瓜(Benincasa hispida Cogn.var.chieh-qua How.)是葫芦科(Cucurbitaceae)冬瓜属(Benincasa Savi)重要蔬菜作物,栽培历史悠久,具有较丰富的遗传多样性,但狭窄的遗传基础和品种间相似系数的上升严重制约了育种工作的开展。加强现有种质资源的保护和评价,明确资源间的亲缘关系,并构建核心种质,对于促进冬瓜属的生物多样性保护、推动资源的可持续利用具有重要的研究意义,因此迫切需要开展冬瓜核心种质构建及遗传多样性分析的工作。本研究基于SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记进行多样性分析,从340份冬瓜种质材料中筛选出111份种质材料构成冬瓜的核心种质。主要结论如下所示:1.选用表型差异较大的B214(中国台湾)和B227(中国广东)两种试验材料,利用引物SSR304设计L16(45)正交表试验对冬瓜的SSR-PCR体系进行优化。经过对比结果表明,冬瓜的较优SSR-PCR反应体系包括1O×Taq Buffer(含 20mMMg2+)2.0μl,dNTPs(1OmM)0.4μl,SSR 引物(10 μ M)1 μl,Taq Polymerase(2U)0.5 μl,DNA 模板(50ng/μl)1 μl,ddH2O补齐至20 μl。2.先选取6份不同地理来源且表型差异显著的冬瓜种质对419对根据冬瓜基因组测序信息开发的特异SSR标记所合成的SSR引物进行多态性筛选。再用从419对基因组SSR引物中筛选出的19对扩增条带清晰、多态性好的引物对340份种质材料进行SSR扩增,对扩增结果进行数据统计并进行数据分析得出19对具有多态性的SSR引物共扩增出182条条带,其中多态性条带169条,多态率为92.86%。3.将8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上清晰且可重复出现的条带统计为“1”,同一位置未出现条带的统计为“0”,生成由数字“1”和“0”组成的原始矩阵。根据原始矩阵利用逐步聚类进行聚类压缩,经过对比显示当压缩比为30%时,能够最大程度的保留原种质群体的遗传多样性,进一步定向补充9份具有优良性状和极值材料后,构成了基于SSR分子数据的含有111份冬瓜种质的冬瓜核心种质。4.利用DPS V16.05软件,采用Jaccard相似系数进行种质间的UPGMA(非加权组平均法)聚类分析。根据聚类分析的结果对111份核心种质进行多样性分析,发现111份冬瓜核心种质的亲缘关系与地理来源关系不大,但与果型大小、种子类型及果皮颜色之间存在一定的相关性。
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