人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在大肠杆菌中的表达及活性研究

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肿瘤相关巨噬细胞对恶性肿瘤的生长、转移和预后可能有着相当程度的影响,近年来的研究表明巨噬细胞在肿瘤局部的浸润与肿瘤细胞分泌的趋化因子,尤其是单核细胞趋化蛋白—1(MCP—1)引起血管内单核细胞的游出聚集密切相关。为进一步研究MCP—1与肿瘤相关巨噬细胞的关系,并探讨将MCP—1用于肿瘤局部生物治疗的可能性,本实验将PCR所得人MCP—1的cDNA克隆至原核表达质粒pGEX—4T—1中构建融合蛋白表达载体pGEX—4T—MCP在大肠杆菌JM109菌株表达了融合蛋白GST—MCP—1。通过谷胱甘肽—Sepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后,体外测定其单核细胞趋化活性。在裸鼠皮下接种胃癌SGC 7901细胞建立胃癌荷瘤裸鼠模型,在肿瘤周边注射纯化后GST—MCP—1观察其对肿瘤生长的影响,并在镜下观察H—E染色肿瘤组织切片中巨噬细胞浸润的情况,结果表明:载体pGEX—4T—MCP转化JM109后,37℃条件下经IPTG诱导可表达相当于菌体总蛋白31.6%的融合蛋白GST—MCP—1,经亲和层析初步纯化的表达产物在体外实验中表现出明确的单核细胞趋化活
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