第一部分中药复方治疗膜性肾病疗效及安全性的系统评价目的:系统评价中药复方治疗膜性肾病（Membranous Nephropathy,MN）的临床疗效及安全性。方法:计算机检索中国知网,万方数据库,维普数据库、中国生物医学数据库、Pub Med、Embase、Cochrane数据库,收集中药复方辅助治疗MN的临床研究,删除重复文献,通过阅读题目、摘要及全文剔除不符合纳入与排除标准的文献,对纳入文献进行数据提取及质量评价,使用Rev Man5.3软件进行Meta分析。使用stata14.0软件绘制漏斗图,判断发表偏倚。将纳入研究的中药处方录入Excel表中,统计药物使用频次和功效分类信息,使用R 3.5软件对中药处方进行关联规则分析。结果:1.最终纳入19个RCT研究中药复方+基础治疗vs基础治疗,共计1022名MN患者。31个RCT研究中药复方+基础治疗+激素+免疫抑制剂vs基础治疗+激素+免疫抑制剂,共计2017名MN患者。2.在常规治疗的基础上使用中药复方治疗MN患者,可提高临床疗效[OR=3.47,95%CI（2.44,4.93）,P＜0.00001]和中医症候疗效[OR=8.21,95%CI（2.66,25.32）,P=0.0002],改善中医症候积分[SMD=1.11,95%CI（0.68,1.54）,P＜0.00001],降低24小时尿蛋白水平[SMD=-1.15,95%CI（-1.54,-0.76）,P＜0.00001],提高血浆白蛋白水平[SMD=1.02,95%CI（0.56,1.48）,P＜0.00001],降低TC水平[MD=-0.78,95%CI（-1.35,-0.20）,P=0.008]和TG水平[MD=-0.73,95%CI（-0.88,-0.58）,P＜0.00001],但在改善肾功能（BUN、Scr）和减少不良反应方面的作用不明显。3.在使用激素和免疫抑制剂治疗的基础上使用中药复方治疗MN患者,可提高临床疗效[OR=2.90,95%CI（2.27,3.70）,P＜0.00001]和中医症候疗效[OR=3.10,95%CI（1.91,5.05）,P＜0.00001],改善中医症候积分[SMD=-0.93,95%CI（-1.34,-0.52）,P＜0.00001],降低24小时尿蛋白水平[SMD=-0.90,95%CI（-1.23,-0.57）,P＜0.00001],提高血浆白蛋白水平[SMD=1.22,95%CI（0.86,1.58）,P=0.000],降低血脂TC水平[SMD=-0.69,95%CI（-0.98,-0.39）,P＜0.00001],降低血脂TG水平[SMD=-0.75,95%CI（-1.09,-0.41）,P＜0.0001],改善肾功能BUN水平[SMD=-0.56,95%CI（-0.97,0.14）,P=0.008]和Scr水平[SMD=-0.58,95%CI（-0.89,-0.27）,P=0.0002],减少不良反应的发生率[OR=0.32,95%CI（0.22,0.44）,P＜0.00001]。4.在常规治疗的基础上使用中药复方治疗MN患者所用中药处方中使用频率前6的中药分别是黄芪、茯苓、山药、当归、党参和白术,治疗宜补脾益肾。在使用激素和免疫抑制剂治疗的基础上使用中药复方治疗MN患者所用中药处方中使用频率前6的中药分别是黄芪、茯苓、白术、丹参、当归和山药,治疗宜益气活血。小结:1.中药复方辅助治疗MN可以提高临床疗效,降低不良反应发生率。2.治疗MN所用中药以黄芪为主,早期宜补脾益肾,中晚期宜益气活血。第二部分檀金川教授治疗膜性肾病用药经验挖掘目的:挖掘分析檀金川教授治疗膜性肾病的用药经验,总结其用药特点及规律。方法:收集檀金川教授治疗膜性肾病的门诊病历,使用Epi Data 3.1软件包进行数据录入,使用Excel 2013、SPSS19.0和R3.5软件包对纳入病历中的中药方进行统计分析及数据挖掘。结果:1.最终纳入中药方353首,其中涉及163味中药,总计出现频次5273次。性温、味甘、归肝经的中药使用频率最高,补虚药、活血化瘀药、祛风湿药和利水渗湿药使用频率较高。2.聚类分析可将中药可分成5类:Ⅰ类为健脾药,Ⅱ类为补肾药,Ⅲ类为通络药,Ⅳ类为利湿药,Ⅴ类为活血药。3.关联规则结果显示,黄芪、当归、川芎、地龙、青风藤、茯苓和甘草的关联性较强。小结:1.檀金川教授治疗膜性肾病用药以黄芪为核心,常配伍川芎、当归、茯苓和青风藤。2.檀金川教授治疗膜性肾病的方法“健脾益肾、化瘀祛湿,攻补兼施”。第三部分益肾通络方治疗膜性肾病的作用机制分析目的:基于网络药理学探讨益肾通络方治疗膜性肾病的作用机制,为后续实验研究开拓思路,为临床应用提供科学依据。方法:通过检索TCMSP和TCMID数据库,筛选出益肾通络方的活性成分及其作用靶点,之后收集MN相关靶点,对中药复方的作用靶点和MN靶点取交集,将交集基因进行PPI网络拓扑分析及核心靶点的筛选。使用R软件对作用靶点进行GO和KEGG富集分析,分析益肾通络方治疗MN的潜在信号通路。使用Cytoscape 3.7.2软件构建药物、靶点、疾病以及信号通路网络图。结果:1.收集到益肾通络方活性成分有70种,作用靶点有237个。2.收集到MN相关靶点2022个。3.益肾通络方治疗MN的潜在作用靶点有130个。4.PPI网络拓扑分析筛选出21个核心靶点和5个基因簇。5.益肾通络方治疗MN的靶点在氧化应激、金属离子、脂多糖、组织氧水平等生物过程,磷酸酶结合、血红素结合部位、蛋白磷酸化结合、核受体、类固醇激素受体活性、细胞因子受体等分子功能,细胞膜、膜微结构域、囊腔、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶复合物、线粒体外膜、胞质囊腔等细胞组分显著富集。6.益肾通络方治疗MN的靶点在糖尿病并发症、内分泌的阻力、IL-17、TNF、Th17细胞分化、细胞凋亡、麻疹、PI3K/Akt、MAPK、VEGF等信号通路显著富集。小结:1.益肾通络方可通过调控多个生物学过程和多条信号通路,介导细胞免疫炎症和凋亡,改善MN肾损伤。2.益肾通络方治疗MN具有“多成分,多靶点,多通路”的特点。第四部分益肾通络方治疗MN的mi RNA-m RNA调控网络构建目的:构建益肾通络方治疗MN的mi RNA-m RNA调控网络,探讨中医药对MN患者mi RNA的调控作用,更深层次地阐释中药复方治疗MN的作用机制,为中医药防治MN的研究提供新途径和新思路。方法:收集MN患者肾组织和肾肿瘤切除患者的癌旁正常组织,通过高通量测序检测两组患者肾组织中mi RNA和m RNA的表达情况,收集益肾通络方的有效成分和作用靶点,使用Venny 2.1软件对益肾通络方中活性成分的作用靶点与测序所得的MN患者差异m RNA进行Venn分析,通过mi RDB、mi RTar Base和Target Scan数据库预测了差异mi RNA的下游靶基因,使用Venny 2.1获取交集m RNA和差异表达mi RNA靶标之间的重叠基因,通过String数据库建立PPI网络,使用Cytoscape建立绘制PPI网络图。使用R软件对作用靶点进行GO和KEGG富集分析,使用Cytoscape3.7.2软件构建益肾通络方治疗MN的mi RNA-m RNA调控网络。结果:1.与对照组相比,MN患者肾组织中有240个差异表达的m RNA（DEG）,包括102个上调的DEG和138个下调的DEG。2.获得12个益肾通络方治疗MN的潜在作用靶点（重叠基因）。3.与对照组相比,MN患者肾组织中有90个差异mi RNA,其中54个mi RNA上调,36个mi RNA下调。4.54个上调的mi RNA预测到10215个靶基因,36个下调的mi RNA则预测到10659个靶基因。5.最终筛选出益肾通络方潜在作用靶点与差异mi RNA靶基因之间的重叠基因有8个。6.益肾通络方潜在调控的mi RNA有15个。7.靶基因在mi RNA的转录、肾上腺素、类固醇激素等生物过程,膜微结构域、核转录因子复合体、核常染色质等细胞成分,SMAD结合、RNA聚合酶II激活转录因子结合、G蛋白-偶联受体结合等分子功能显著富集。8.靶基因在TNF、IL-17、B细胞受体、Erb B等信号通路显著富集。小结:1.益肾通络方可通过调控mi RNA-m RNA网络治疗MN。2.mi RNA-m RNA调控网络可为后续研究提供思路和研究基础。第五部分益肾通络方对MN大鼠mi R-514a-5p/TNFSF15通路的影响及机制目的:基于mi R-514a-5p/TNFSF15信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病大鼠肾小球足细胞凋亡的机制研究,一方面阐述益肾通络方治疗MN的可能机制,另一方面验证第四部分结果的准确性。方法:大鼠尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（cationic bovine serum albumin,C-BSA）建立MN大鼠模型,将造模成功的MN大鼠随机分为模型组（生理盐水,等体积）、益肾通络方高、中、低剂量组(益肾通络方,26.44、13.22、6.61 g·kg-1)和贝那普利组(盐酸贝那普利,10 mg·kg-1),取健康大鼠作为正常组（生理盐水,等体积）,各组10只,分别给予相应剂量药物灌胃,每日1次,连续干预4周。给药结束后检测大鼠24小时尿蛋白（UTP）水平,血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）含量水平;六胺银染色、透射电镜、Ig G、C3免疫荧光观察大鼠肾脏病理学变化;RT-q PCR法检测大鼠肾组织中mi R-514a-5p及TNFSF15m RNA表达水平;Western blot法和免疫组化法检测大鼠肾组织中TNFSF15、Podocin、Nephrin、Podocalyxin、Synaptopodin、BAD、Bax、Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达水平,Tunnel法检测大鼠肾组织细胞凋亡率。使用双荧光素酶报告实验检测mi R-514a-5p与TNFSF15的结合力。结果:1.与正常组比较,模型组大鼠UTP水平增加（P＜0.05）;与模型组比较,贝那普利和益肾通络方组大鼠UTP水平有不同程度的减少（P＜0.05）,其中益肾通络方高剂量组改变最明显。2.与正常组相比,模型组大鼠肾小球基底膜出现不同程度的增厚和空泡变性,Ig G和C3沿肾小球毛细血管壁颗粒状沉积,可见大小不等的电子致密物沉积,足细胞足突广泛融合。经益肾通络方和盐酸贝那普利干预后,大鼠肾组织病理学改变均有所减轻。3.与正常组比较,模型组大鼠血清中TC、TG水平升高,TP、ALB水平降低（P＜0.05）,BUN、Scr水平无明显改变;与模型组比较,贝那普利组和益肾通络方组大鼠血清中TC、TG水平有不同程度的下降,TP、ALB水平有不同程度的升高（P＜0.05）,BUN、Scr水平无明显改变。4.与正常组比较,模型组大鼠肾组织中mi R-514a-5p水平显著降低,TNFSF15 m RNA水平显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,贝那普利组和益肾通络方组大鼠肾组织中mi R-514a-5p水平明显升高,TNFSF15 m RNA水平明显降低（P＜0.05）,其中益肾通络方高剂量组改变最明显。5.免疫组化结果显示,Podocin、Nephrin、Podocalyxin和Synaptopodin阳性信号呈棕黄色。与正常组比较,模型组大鼠肾组织中足细胞标志蛋白Nephrin、Podocin、podocalyxin、Synaptopodin蛋白表达减弱;与模型组比较,益肾通络方和贝那普利组大鼠足细胞标志蛋白Nephrin、Podocin、podocalyxin、Synaptopodin蛋白表达均有不同程度增强。6.与正常组比较,模型组大鼠肾组织中细胞凋亡明显增加;与模型组比较,益肾通络方和贝那普利组大鼠肾组织中细胞凋亡明显减少（P＜0.05）。7.免疫组化结果显示,TNFSF15、Bax、BAD、Bcl-2、BCL-XL阳性信号呈棕黄色。与正常组相比,模型组大鼠肾脏中TNFSF15、Bax、BAD蛋白表达增强,Bcl-2、BCL-XL蛋白表达水平减弱（P＜0.05）。与模型组相比,益肾通络方和贝那普利组大鼠肾脏TNFSF15、Bax、BAD蛋白表达减弱,Bcl-2、BCL-XL蛋白表达水平增强（P＜0.05）。8.Western blot结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肾脏中TNFSF15、Bax、BAD蛋白表达水平升高,Bcl-2、BCL-XL蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与模型组相比,益肾通络方和贝那普利组大鼠肾脏中TNFSF15、Bax、BAD蛋白表达水平降低,Bcl-2、BCL-XL蛋白表达水平升高（P＜0.05）。9.与mi R-NC组相比,mi R-514a可显著降低转染TNFSF-3’-UTR wt的足细胞的相对荧光活性（P＜0.05）,而对TNFSF-3’-UTR mut的相对荧光活性无明显影响（P＞0.05）。小结:1.益肾通络方可通过抑制肾组织足细胞凋亡,减轻MN大鼠肾损伤。2.益肾通络方减轻MN大鼠肾损伤作用与其抑制mi R-514a-5p/TNFSF15通路有关。结论1.以黄芪为主药的中药复方治疗MN疗效确切,可明显提高西医基础治疗或激素免疫抑制剂治疗效果,降低不良反应。2.檀金川教授治疗MN用药经验是“健脾益肾、化瘀祛湿,攻补兼施”。3.益肾通络方治疗MN具有“多成分,多靶点,多通路”的特点。4.益肾通络方可以通过调控mi RNA-m RNA-信号通路网络治疗MN。5.益肾通络方可通过抑制肾组织足细胞凋亡,减轻MN大鼠肾损伤。6.益肾通络方减轻MN大鼠肾损伤作用与其抑制mi R-514a-5p/TNFSF15通路有关。