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研究背景:脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性肿瘤,治疗效果差,易复发,死亡率高,尤其WHO IV级的胶质母细胞瘤(GBM)患者更是如此。胶质瘤具有增殖快,浸润生长,放化疗耐受等特性。胶质瘤的治疗方法有传统开颅手术,定向放射治疗,化疗药物治疗,免疫治疗以及分子靶向治疗等。近些年来随分子生物学研究深入,肿瘤细胞发生发展的分子机制研究越来越透彻。人们发现肿瘤的生物学行为与一些癌蛋白过度表达,相关信号通路被激活有关。这些研究为人类在根本上治愈恶性肿瘤,提供了可能。分子靶向治疗就是针对肿瘤细胞中的某一关键分子,阻断、抑制其功能,从而抑制或杀死肿瘤细胞。因此,寻找治疗靶点是分子靶向治疗的一个重点。GOLPH3是一种新近发现的癌蛋白,在多种恶性肿瘤中过度表达,表达量与肿瘤的病理级别正相关。GOLPH3与肿瘤的增殖分裂、侵袭、迁移,化疗耐药等生物学行为密切相关。初步发现GOLPH3可能与胶质瘤细胞对阿霉素的敏感性以及阿霉素引起的DNA损伤修复有关;GOLPH3的这种功能可能与AKT1和UBE2S有关。GOLPH3可能是胶质瘤分子靶向治疗的潜在靶点。基于此基础,做了如下相关实验研究。研究目的:研究靶向抑制GOLPH3后胶质瘤细胞对阿霉素敏感性变化;研究靶向抑制GOLPH3联合使用阿霉素后胶质瘤细胞凋亡变化;研究分析在抑制GOLPH3表达及应用阿霉素处理后,AKT1、GOLPH3、UBE2S三者之间关系。研究方法:1、利用小干扰siRNA转染技术,瞬时转染处理胶质瘤细胞U251、U87细胞系,得到GOLPH3不同表达水平的胶质瘤细胞,通过Western blot及RT-PCR实验技术检测转染效果。2、依据是否下调GOLPH3表达,将U251、U87细胞系分别分为对照组和处理组。将各分组细胞,分别联合阿霉素处理。应用CCK-8法检测各组细胞阿霉素IC50值改变;应用流式细胞术检测各组细胞凋亡变化;应用Western blot技术检测相关蛋白AKT1、UBE2S与GOLPH3变化的相关关系。研究结果:1、经Western blot验证,瞬时转染处理U251、U87细胞系后,能有效下调各组GOLPH3的表达水平,P<0.05。2、在靶向抑制GOLPH3表达后,对于U251、U87细胞对阿霉素的IC50值分别由原来的(26.53士3.6)μg/ml和(30.62士4.1)μg/ml,变为(7.45士1.4)μg/ml和(12.51士2.5)μg/ml。差异显著有统计学意义(P<0.05)。3、靶向抑制GOLPH3表达并联合阿霉素治疗后,U251、U87胶质瘤细胞各组中晚期凋亡及坏死变化,自对照组、GOLPH3-siRNA处理组、阿霉素处理组到联合处理组,依次增加,组间差异具有统计学意义(P<0.05),联合处理组相较于其余三组尤为明显(P<0.01);U251、U87胶质瘤细胞各组中早期凋亡变化,U251细胞系中,组间差异具有统计学意义(P<0.05),U87细胞系中,组间差异不具有统计学意义(P>0.05)。4、经Western blot实验验证,U251细胞系中下调GOLPH3表达水平以及联合阿霉素治疗后,相对于对照组,GOLPH3-siRNA处理组,AKT1、UBE2S表达水平降低(P<0.05);阿霉素处理组,AKT1、UBE2S表达水平降低(P<0.05);联合处理组,AKT1、UBE2S表达水平较对照组及单因素处理组均明显下调(P<0.01),结果有统计学差异。结论:靶向抑制GOLPH3可以增加胶质瘤细胞对阿霉素敏感性;靶向抑制GOLPH3联合阿霉素能明显促进胶质瘤细胞凋亡;GOLPH3-AKT1-UBE2S通路在胶质瘤阿霉素耐药中起重要作用。