论文部分内容阅读
目的帕金森病(idiopathic Parkinson’s disease,PD),简称PD,是第二大常见的中枢神经系统退行性疾病,近几十年的研究表明,PI NK1(PTEN-induced putative kinase 1)的缺失能够导致线粒体形态功能异常,而线粒体的功能紊乱是PD发病的一个重要原因。Sir2(Silent information regulator 2)属于sirtuin蛋白家族的一员,最近的研究发现,Sir2能够诱导线粒体未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPRmt),改善线粒体功能。目前已经构建包括PD等许多神经变性疾病转基因果蝇模型,本研究意在探讨Sir2对PD转基因果蝇是否具有神经保护作用及其与UPRmt的相关性。方法选用Mhc-GAL4启动子,利用经典的GAL4-UAS系统,构建Mhc-GAL4/UAS系统Pink1B9 PD转基因果蝇模型,通过遗传干预使Si r2在Mhc-GAL4/UAS系统PD转基因果蝇运动神经元内过表达,分别进行飞行、翅膀异翅率统计,ATP及mRNA水平检测等观察Sir2过表达对果蝇运动神经元变性是否具有神经保护作用,然后通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制UPRmt相关基因Hsp60、GCN-2的表达,构建Sir2过表达而UPRmt抑制的双平衡系PD转基因果蝇,进行飞行、翅膀异常率统计,相关分子伴侣mRNA检测以及蛋白免疫印迹等试验,观察Sir2过表达对抑制果蝇运动神经元变性的作用,以及验证这种作用是否与UPRmt相关。结果成功构建Mhc-GAL4/UAS系统Pink1B9 PD转基因果蝇模型、Sir2过表达的PD转基因果蝇模型以及UPRmt抑制而Sir2过表达的双平衡系PD转基因果蝇模型。Sir2过表达抑制了PD转基因果蝇运动神经元变性,飞行能力得到改善,翅膀异常率下降,ATP含量升高,显著改善了果蝇运动能力,而在UPRmt被抑制后,Sir2的保护作用明显减弱。结论Sir2过表达对Mhc-GAL4/UAS系统PD转基因果蝇具有神经保护作用,而这种神经保护作用与UPRmt相关。