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目的：1.探求白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)在人外周血CD4~+效应T细胞(effector T cells)中的表达情况。2.研究在脂多糖(LPS)刺激下,CD4~+效应T细胞活化程度与IL-37表达水平的时效关系。3.证明IL-37可以抑制CD4~+效应T细胞发挥免疫效应。方法：第一部分：分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选分选CD4~+T淋巴细胞,通过胎盘蓝检测细胞活性,应用流式细胞技术检测CD4~+效应T细胞纯度。1.增殖活性检测：设置刺激剂组(脂多糖-LPS:1ug/ml)、阴性对照组(即无LPS刺激细胞组),通过CCK-8技术检测不同分组之间CD4~+T淋巴细胞增殖活性差异,得出刺激时间(24h、48h、72h)与细胞增殖活性时效关系.2.IL-37基因水平表达情况：通过PCR技术明确CD4~+效应T细胞中IL-37mRNA的表达。3.IL-37蛋白水平表达情况：分别通过Western blot技术和流式细胞技术检测LPS刺激下,不同刺激时间下(24h、48h、72h)效应T淋巴细胞中IL-37蛋白表达水平差异.4.IL-37细胞内表达定位：通过免疫荧光与激光扫描共聚焦技术检测IL-37蛋白在效应T淋巴细胞中表达情况,明确其表达位置.第二部分：分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),应用免疫磁珠分选技术获得CD4~+效应T细胞,应用小分子干扰RNA沉默效应T细胞中IL-37的表达,另设置siRNA-scramble无效干扰细胞组、正常对照细胞组。1.siRNA-IL-37蛋白水平抑制效果检测：采用流式细胞技术检测小分子干扰RNA对IL-37的沉默效果,对比siRNA-scramble干扰后效应T细胞组、正常对照效应T淋巴细胞在LPS刺激作用72h后,IL-37表达情况。2.增殖活性检测：采用CCK-8法检测siRNA-scramble干扰后细胞组、正常细胞组、siRNA-IL37干扰后细胞组在LPS刺激72h时的增殖活性。3.通过流式细胞技术检测siRNA-scramble干扰组、正常细胞组、siRNA-IL-37干扰组细胞中CD152表达情况。4.细胞效应因子检测：采用Elisa技术,检测正常对照细胞组、siRNA-IL37干扰后T细胞组细胞培养上清液中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4.IL-17水平的变化。结果：1.健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs)经过磁珠分选,应用胎盘蓝试剂染色检测,细胞活性大于98%；应用流式细胞仪检测得到CD4~+效应T淋巴纯度达99%。2.应用LPS刺激效应T淋巴细胞激活,采用CCK-8法检测不同时间段(24h、48h、72h)效应T细胞增殖活性,结果显示其在刺激达到72h时增殖活性最高。3.通过PCR技术检测,CD4~+效应T细胞中存在IL-37-mRNA的表达,且随着LPS刺激作用时间的延长,IL-37-mRNA表达水平逐渐升高.4. Western blot结果显示,CD4~+效应T细胞可表达IL-37蛋白；随着LPs刺激作用时间的延长(24h、48h、72h),CD4~+效应T细胞中IL-37蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05).5.通过流式细胞技术检测,CD4~+效应T细胞表达IL-37蛋白,且随着LPS刺激时间的延长(24h、48h、72h),细胞中IL-37-FITC表达水平增高.6.免疫荧光与激光扫描共聚焦结果显示,CD4~+效应T淋巴细胞中表达IL-37,可在细胞核、胞质表达,以细胞核周围表达最为丰富。7.应用流式细胞技术检测各组细胞中CD152表达水平显示,siRNA-IL-37干扰组效应T细胞CD152表达水平较siRNA-scramble干扰组及正常细胞明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)8.CCK-8检测效应T淋巴细胞增殖活性结果显示,相比于siRNA-scramble干扰组及正常对照细胞组,siRNA-IL-37细胞组在450nm波长处OD值明显升高(P<0.05),表明该组效应T细胞增殖活性升高；siRNA-scramble干扰组与正常效应T细胞相比较,OD450值无明显差异性(P>0.05),表明siRNA-scramble干扰组对效应T淋巴细胞抑制效应微弱,与正常组无明显差异。9.采用Elisa技术,检测siRNA-IL-37沉默后效应T淋巴细胞组及正常对照组细胞在LPS刺激作用培养下72h后,细胞培养上清液中细胞因子IL-2、IL-4. IL-17、IFN-γ含量,结果表明siRNA-IL-37干扰后,四种细胞因子含量均有不同程度的升高,于正常组相比较差异均有统计学意义(P<0.05),表明IL-37的表达可能影响CD4~+效应T淋巴细胞炎性细胞因子的生成。10.比较siRNA-IL-37干扰组及正常细胞组细胞培养液中IFN-γ/IL-4值,相对于正常对照组细胞,siRNA-IL-37干扰后细胞培养液中IFN-γ/IL-4比值升高,但无显著差异(P>0.05),本次实验尚不能明确IL-37对效应T细胞中Th1、Th2细胞极化趋势的作用。结论：1.健康人体外周血CD4~+效应T淋巴能够表达IL-37。2.在炎症环境刺激下,随着IL-37的表达水平随着效应T淋巴细胞活化水平增高而升高,本实验环境下,IL-37在细胞活性最强的72小时表达尤为明显,并且IL-37蛋白表达水平与信使RNA时效性趋势相同.3.IL-37在胞质和胞核内均可表达,以细胞核周围表达最为丰富.4.IL-37能够影响CD4~+T淋巴细胞的生物学活性,干扰IL-37的表达后,CD4~+效应T淋巴细胞的生物学活性增强.