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研究背景胰腺癌(Pancreatic cancer;PC)属于消化道恶性肿瘤,恶性程度非常高。近年来,PC发病率在全球都呈大幅升高。死亡率高,在美国恶性肿瘤中病死率排名第4。预后差,5年生存率不足8%。中国国家癌症中心数据显示2015年我国胰腺癌发病率和死亡率在恶性肿瘤中分别排名第9位、第6位。胰腺癌治疗的基础是多学科综合诊治。根治性手术目前仍是患者达到治愈的唯一的有效途径。但仅15%~20%的患者有手术机会。目前提倡新辅助治疗先行的治疗模式。化疗是新辅助治疗、胰腺癌术后以及晚期胰腺癌的重要治疗手段。化疗药物的耐药性已经成为影响胰腺癌治疗效果的主要问题,因此极有必要对胰腺癌对化疗药物耐药的分子生物学机制进行探讨。Lnc RNA是一种不编码蛋白质的非编码RNA分子,它的分子长度通常超过200核苷酸。近年来,许多研究发现Lnc RNA在X染色体沉默、原癌基因激活、转录干扰、基因印迹等方面起着重要的调节作用。研究发现,在肝癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤中,大量的Lnc RNA异常表达,在癌症的进展过程中这些表达异常的Lnc RNA起着关键调节因子的作用。既往研究报道,部分Lnc RNA在胃癌、乳腺癌、肺癌和肝癌中起到调节化疗敏感性和耐药性的作用,此外在肿瘤中部分Lnc RNA的表达谱与耐药性的变化关系密切。Lnc RNA MIR31HG位于9p21.3,长度为2166b P,已被发现在非小细胞肺癌、乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌中表达异常,并参与癌症的进展。但MIR31HG在胰腺癌中的表达和调控作用尚不清楚,其同胰腺癌耐药间的关系也有待进一步研究。研究目的:探讨Lnc RNA在胰腺癌中的异常表达情况;研究Lnc RNA MIR31HG在胰腺癌组织中的表达情况,及其与临床病理学资料之间的关系;观察干预MIR31HG表达对胰腺癌增殖、迁移等生物学行为的影响;探讨MIR31HG在胰腺癌耐药中相关作用及可能的分子生物学机制,为胰腺癌靶向干预提供新的靶点。研究方法:1.对6对胰腺癌及癌旁组织进行Lnc RNA芯片检测,筛选出具有差异性表达的Lnc RNA,确定目标Lnc RNA。2.提取胰腺癌组织样本及胰腺癌细胞系的RNA,进行荧光定量PCR,验证MIR31HG表达的情况。根据MIR31HG在组织样本中的表达情况和胰腺癌患者临床病理特征进行统计分析。3.合成Si RNA,下调MIR31HG的表达,通过CCK8实验和Transwell实验探索下调MIR31HG对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。4.检测下调MIR31HG表达后对胰腺癌细胞5-FU的IC50的影响。观察同一浓度5-FU处理下,干预MIR31HG表达对胰腺癌细胞系存活的影响。5.Western-blot检测下调MIR31HG表达对C-myc表达有何影响。研究结果:1.基因芯片检测到Lnc RNA 26561个,蛋白质编码基因28695个。在选定的6对组织中,FC>2倍,P<0.05的Lnc RNA有1587个(上调的903个,下调684个);2.胰腺癌组织中MIR31HG的表达明显高于癌旁组织。MIR31HG在胰腺癌细胞系As PC-1、PANC-1、Capan-1、Capan-2、SW1990中的表达水平高于正常的人类胰腺导管上皮细胞HPDE6c-7;3.不同肿瘤大小患者的MIR31HG表达水平不同,肿瘤直径>3cm的患者MIR31HG表达水平较高(P=0.015);有转移患者组MIR31HG的表达高于无转移患者组(P=0.031),AJCC分期III-IV期患者组MIR31HG的表达高于0-II期患者组(P=0.011),分化低的患者组MIR31HG的表达高于分化高的患者组(P=0.011),而且Ca19-9高的患者组MIR31HG的表达高于Ca19-9低的患者组(P=0.026);4.MIR31HG表达下调后的胰腺癌细胞的迁移能力下降,增殖能力降低;5.MIR31HG表达下调后PANC-1、As PC-1细胞对5-FU的IC50较NC组显著下降;在同一浓度5-FU处理下,下调MIR31HG表达的PANC-1、As PC-1细胞存活率下降;6.下调PANC-1、As PC-1细胞MIR31HG的表达后C-myc蛋白表达下降。结论:本研究发现部分Lnc RNA在胰腺癌中表达异常。Lnc RNA MIR31HG在胰腺癌组织及胰腺癌细胞中均高表达,并与肿瘤大小、转移、临床分期、分化程度有关,可能发挥促癌基因的作用。下调MIR31HG表达可对胰腺癌细胞的迁移和增殖产生抑制作用,增强胰腺癌细胞对5-FU的敏感性,降低其对5-FU的耐药性。MIR31HG可能通过调控C-myc来影响胰腺癌细胞的增殖、迁移和耐药。MIR31HG可能作为胰腺癌耐药的重要分子靶标,为诊治胰腺癌提供新的方向。