论文部分内容阅读
本文对氨丁苯酞（ABP）的代谢转化进行了系统研究。首先从体外代谢研究入手，鉴定了大鼠肝微粒体温孵体系中的代谢物。结果表明氨丁苯酞体外代谢转化以氨基酰化反应为主。在此基础上进一步对体内代谢进行研究，采用梯度洗脱HPLC法分析大鼠胆汁、尿和血浆中氨丁苯酞及其代谢物。从胆汁样品中直接分离制备了4个代谢物。我们还采用GC-MS、LC-MS及LC-MS／MS技术对氨丁苯酞及其代谢产物进行了研究，检测到了一些微量代谢物。通过上述研究，共发现氨丁苯酞体外及体内13种代谢产物，基本阐明了它的代谢途径。在对氨丁苯酞消旋体代谢研究的基础上，还考察了两个对映体的代谢差异，讨论了代谢的立体选择性。本文研究的具体内容包括以下几个方面：1．氨丁苯酞在大鼠肝徽粒体中的代谢转化研究采用大鼠肝微粒体温孵体系对氨丁苯酞进行体外代谢，通过HPLC-DAD方法对代谢样品进行分析，检测到4个代谢物。结果表明氨丁苯酞在该体系中代谢转化率很低。采用GC-MS方法对代谢样品进行分析，检测到3个代谢物（M1，M2，M3），通过与合成的代谢物标准品进行对照，进一步确定了代谢物M1和M2的结构。体外代谢研究表明氨丁苯酞的体外代谢转化以氨基酰化反应为主。2．氨丁苯酞体内代谢研究采用梯度洗脱HPLC法对胆汁、尿样和血浆中氨丁苯酞及其代谢物进行研究。直接从大鼠胆汁样品中分离制备了4个代谢物（M4，M5，M6，M7），并通过MS、MS／MS和1HNMR谱进行了鉴定。另外，还分析检测到一些微量代谢物。体内代谢研究结果表明，氨丁苯酞在体内广泛代谢，其代谢转化以氨基乙酰化反应为主，同时伴随羟化反应的发生。3．氨丁苯酞代谢的立体选择性在上述研究基础上，考察了氨丁苯酞两个对映体的代谢差异。体外代谢研究表明，采用大鼠肝微粒体温孵氨丁苯酞的对映体未产生显著差异。对大鼠分别给药（+）-ABP和（-）-ABP后收集的胆汁样品进行分析比较后发现，（+）-ABP产生的代谢物M1、M6和M7的量大于（-）-ABP产生的相应代谢物，表现出较明显的立体选择性，立体选择性方向为（+）>（-）。尿样的分析结果表明（+）-ABP主要以代谢物形式经尿排泄，而（-）-ABP主要以原药形式经尿排泄。（+）-ABP在血浆中的代谢物以M1的相对含量最高，而（-）-ABP的代谢物中以M4的相对含量最高。另外，ABP的两个对映体与消旋体的代谢亦存在一定差异。4．GC-MS法分析检测氨丁苯酞及其代谢产物建立了GC-MS技术分析检测氨丁苯酞及其代谢产物的方法。该法共检测到体外和体内11种代谢物。通过EI-MS谱的解析，找到了原药及其代谢物的质谱裂解规律，从而推断出代谢物的结构。其中代谢物M3的羟基化位置由质谱尚未能确定。5．LC-MS和LC-MS／MS法分析检测氨丁苯酞及其代谢产物考察了利用LC-MS和LC-MS／MS技术直接分析检测生物样品中氨丁苯酞及其代谢产物的方法。利用这些技术共检测到大鼠体内8个代谢物，发现了利用其他方法未检测到的C3位羟基化的代谢产物M13。