外源H<,2>O<,2>和AsA对大蒜试管苗玻璃化及内源活性氧代谢特征的影响

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大蒜(Allium sativum L.)是重要的药食兼用植物,在世界各地普遍栽培。大蒜栽培种主要利用鳞茎进行无性繁殖,因此极易造成病毒积累。通过组织培养技术脱毒是大蒜品种提纯复壮的有效手段,但是大蒜试管苗培养过程中玻璃化现象严重,因此对玻璃化机理的研究具有重要的理论意义与应用价值。近年来的研究表明,试管苗玻璃化过程中存在不同程度的氧化胁迫。与正常试管苗相比,玻璃化苗的O2·-产生速率和H2O2含量均提高,脂质过氧化程度增强,保护酶调节功能紊乱,说明试管苗玻璃化与活性氧代谢相关。本试验以大蒜品种‘二水早’为试材,研究了外源H2O2对大蒜试管苗玻璃化及活性氧代谢动态变化的影响,外源H2O2和AsA作用下内源活性氧的产生和定位,以及活性氧清除剂AsA对外源H2O2诱导下大蒜试管苗玻璃化及活性氧代谢动态变化的影响,从而进一步明确活性氧代谢与大蒜试管苗玻璃化的关系,从活性氧代谢的角度探讨大蒜试管苗玻璃化的机理,为试管苗玻璃化的控制提供理论依据。主要研究结果如下:1.H2O2胁迫影响试管苗生长,2.0 mmol·L-1 H2O2处理显著促进试管苗玻璃化的发生;在H2O2胁迫下,试管苗SOD、POD、CAT和APX活性先升高后降低,MDA和膜透性水平明显提高。说明氧化胁迫可诱导试管苗玻璃化,脂质过氧化可能是试管苗玻璃化的诱因之一。2.O2·-和H2O2的组织化学染色结果表明,各处理下活性氧产生和积累的区域均主要集中在试管苗叶片和假茎。亚细胞定位结果表明,H2O2主要积累在靠近叶绿体一侧的细胞壁及细胞间隙。外源H2O2胁迫下大蒜试管苗内源活性氧产生和积累量较多,外源H2O2+AsA处理与正常培养条件下内源活性氧产生和积累量较少。3.添加活性氧清除剂AsA,能诱导外源H2O2胁迫下试管苗保护酶活性增强,抗氧化物质含量提高,O2·-产生速率和内源H2O2含量降低,MDA含量减少,膜透性下降,表明AsA能有效减缓由H2O2胁迫诱导的活性氧的伤害作用,从而显著降低试管苗玻璃化的发生。
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