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肺发育的程度与出生婴儿的生存能力密切相关，而肺泡发育与肺泡上皮细胞的分化是肺发育程度的形态学标志，肺泡发育特别是AECⅡ的发育不完善会导致肺表面活性物质及其相关蛋白的合成和分泌障碍，影响肺功能并导致肺部疾病。许多肺部疾病如囊性肺纤维化、呼吸窘迫综合征和慢性肺疾病，严重影响着新生儿和婴幼儿的生命安全和生存能力。成熟的肺上皮细胞都是胚胎期的上皮干细胞发育而来，肺发育的过程伴随着上皮干细胞不断发育分化以及凋亡的过程。肺部干细胞研究的重要性在于，不仅对肺的发育有一个新的认识，而且能估计肺部疾病和肿瘤的发生发展情况并应用于体内的基因治疗。但肺上皮干细胞的研究进展相对滞后，其原因就是目前还缺乏鉴定肺上皮干细胞的有效手段。近些年来，人们普遍认为在肺支气管树的不同解剖部位存在着不同的具有干细胞特征的细胞亚群。在肺组织中是否存在一种“普遍性”的多潜能的上皮干细胞一直是人们努力探索和研究的疑难问题。 研究证明，TTF-1作为重要的调控上皮细胞特异性基因表达的同源核转录因子，对促进胎肺发育起重要作用。SP-A和SP-B是组成PS的重要的相关蛋白，直接反映着肺泡发育尤其是AECⅡ分化与成熟程度。新近研究表明，TTF-1在体外可以激活人肺泡上皮细胞的SP-A、SP-B和SP-C的基因转录，然而TTF-1、SP-A和SP-B在人胎肺发育过程中的表达规律在国内还少见报道。目前发现和鉴定干细胞的大多数成果都归功于标记物的使用，但肺上皮干细胞还缺乏特有的表面标记。国外已有研究报道在小鼠胎肺发育中持续强阳性表达mTERT的上皮细胞可能充当肺干细胞，而上皮干细胞标记物CK-19和神经前体细胞表面标记nestin在人胎肺中的表达规律及其在鉴定肺上皮干细胞中的作用国内外均未见报道。因此本研究拟通过观察人胎儿肺发育过程中上皮细胞发育分化的形态特征和特异性蛋白的表达，进一步阐明肺上皮细胞发育分化的规律及其调节因素，在形态和功能上对发育过程中的肺上皮干细胞进行鉴定，初步明确可作为鉴定肺干细胞的标志物及方法，同时阐明其存在的壁完和分布特征，为后续的研究工作打下基础。 材料和方法 一，收集水囊引产的妊娠10周一34周正常胎儿肺组织共41例及新生儿和成人正常肺组织各2例，取材、固定、包埋制成石蜡切片，HE染色，光镜观察;选取其中21例胎肺组织取材后切成Illun3大小的组织块，2.5%戊二醛前固定，l%四氧化饿后固定，乙醇丙酮系列脱水，Spur(环氧树脂)包埋，超薄切片，醋酸铀一构椽酸铅双染色，透射电镜观察。 二，应用免疫组化超敏SP法检测TTF一1、SP一A和SP一B在人胎肺发育中的表达，同时，首次检测干细胞抗原hTERT、上皮干细胞抗原CK一19和神经前体细胞表面标记nestin在人胎肺中的表达，光镜观察。 三，应用双重标记免疫组化染色同时检测TTF一1和SP一A、TTF一1和SP一B在人胎肺中的表达，光镜观察。 四，应用原位杂交的方法检测神经前体细胞表面标记nestin--mRNA在人胎肺中的表达，光镜观察。 实验结果 一，肺上皮细胞的分化发育观察:胎肺发育的早期以支气管的不断分支和管壁结构的不断完善为主，上皮主要为柱状的未分化细胞。19周时，在形态上即可辨认AECll、AECI和气血屏障。25周原始肺泡开始形成，肺泡上皮以立方形的AECll为主，但AECI逐渐增多，气血屏障逐渐变薄。 二，TTF一1、SP一A和SP一B的表达与分布:TTF一1在胎肺第10周已开始表达，定位于上皮细胞核内，随着支气管的发育分化，远端位置的反应总是较近端者强。SP一A蛋白在胎肺10周亦开始表达，SP一B蛋白晚于SP一A于胎肺16周开始表达，定位于上皮细胞胞浆。SP一A和SP一B在小管期表达逐渐增强，阳性反应细胞主要为无纤毛细胞。胎肺发育末期、新生儿肺至成人肺中，TTF一1、SP一A和SP一B阳性反应均在AECll和肺泡前提细胞中稳定表达，纤毛细胞和AECI无表达，TTF一1分布的时间、空间特征与肺泡表面蛋白SP一A和SP一B的分布有重叠性，即它们可以分别在 一3一细胞浆和细胞核同时表达。原始肺泡上皮细胞SP一A和SP一B的表达在胎儿出生前增加不明显，出生后合成分泌明显增多。 三，hTERT在胎肺组织中的表达与分布:胎肺发育10周时检测到hTERT的表达，上皮和间质均有表达。hTERT的表达高峰在小管期的早期即17周一20周，21周一24周时上皮细胞hTERT阳性细胞逐渐向远端呼吸道迁移，25周hTERT开始表达于新生的原始肺泡上皮，呈减弱趋势。hTERT反应较强的细胞呈区域性或散在分布于小支气管、细支气管基底膜和肺泡上皮，在形态上类似小支气管、细支气管基底样细胞中的少部分细胞和原始肺泡AECll中的少部分细胞。 四，CK一19在人胎肺发育中的表达:胎肺发育早期表达丰富，几乎所有的上皮细胞均CK19表达阳性，定位于上皮细胞的胞膜和胞浆，间质细胞无表达。随着胎肺的发育，主要在立方状的上皮细胞中表达，成熟的AEC工无表达。阳性细胞主要有两种形态:一种胞核较大，圆形或椭圆形