生物柴油是由植物或动物油脂(主要成分为甘油三酯)与醇类发生酯交换反应而生成的脂肪酸酯,是一种可再生的环保型的生物能源。传统的方法合成生物柴油能耗大,污染环境,且生产成本高,因此用脂肪酶催化合成生物柴油的方法获得广泛关注,它的优点在于条件温和,无污染,产物易分离等。脂肪酶是羧基酯水解酶,其天然底物为甘油酯,是一种重要的工业酶制剂,应用广泛,然而游离酶存在价格昂贵,反应后不易分离,难以实现工业化连续反应等诸多的弊端,所以本实验采用固定化技术减少这些弊端的产生,利用吸附法和包埋法相结合固定化实验室自制的Candida sp.99-125脂肪酶,用于生物柴油的催化合成。本文以硅藻土为载体对脂肪酶进行吸附,并考察得到吸附的最佳条件为：在30mLpH7.5的磷酸缓冲溶液中,酶与吸附剂硅藻土的质量比为1：3,其中,硅藻土采用添加剂(聚乙二醇6000、硫酸镁、吐温80、椰子油、卵磷脂)进行活化,吸附温度为25℃,吸附时间为3h,得到最优的包埋条件为：将1.5%的海藻酸钠溶液15mL,1%的明胶溶液15mL与之前吸附好的体系混合均匀后用注射器将其滴加入0.4mol/L的氯化钙溶液中形成凝胶状小球,干燥后保存。将所得的固定化酶用于催化月桂酸和正辛醇的反应,连续反应28批后酶活基本保持稳定。将固定化酶在4℃的条件下放置五个月,酶活降低小,储存稳定性很好。通过扫描电子显微镜对固定化酶的结构进行分析,固定化酶内部孔径多且均匀,网格结构发达,通过能谱分析固定化酶内部,酶与硅藻土以吸附的形式存在,分布均匀。将所得的固定化酶用于催化地沟油合成生物柴油的反应,单批反应转化率最高达到92%,连续反应十一批以后转化率仍保持在70%以上,与原始的发酵酶粉相比,固定化后的脂肪酶酶活和稳定性得到提高,而且便于工业化生产。