紫景天黄酮凝胶对实验性牙周炎大鼠牙周组织及血清中MMP-2,MMP-9表达的影响

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目的:探究紫景天黄酮凝胶(Hylotelephium purpureum gel,HPG)对实验性牙周炎大鼠牙周组织及血清内基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,为探索治疗牙周炎(Periodontitis,PD)的新药、开采长白山野生中药材提供理论及实验依据。方法:60只正常Wistar大鼠常规喂养2周后从中随机取出10只设为正常对照组,雌雄各半,不做任何处理,剩余50只大鼠采用带牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的丝线结扎并将其包埋于大鼠后磨牙牙颈部的龈沟内,之后每隔2天将等量的含2μl牙龈卟啉单胞菌和15μl 1 mg/ml脂多糖(Lipopolysaccharid,LPS)的生理盐水均匀注入到大鼠龈沟内丝线处。4周后,检测正常对照组和建模大鼠牙龈指数(Gingival index,GI)和龈沟出血指数(Sulcus bleeding index,SBI),淘汰丝线脱落、意外死亡的8只不合格大鼠,随机抽取建模大鼠和正常对照大鼠各2只处死做病理学观察,确认建模成功。将未做处理的8只大鼠设为正常对照A组,将建模完成后的剩余40只大鼠随机分成:模型对照B组,复方牙痛酊(Compound Toothache Tincture,CTT)治疗C组,紫景天高、中、低(1.0%浓度、0.5%浓度、0.25%浓度)治疗D、E、F组,每组数量均为8只,各组间自然情况无显著差异。之后A组大鼠不做特殊处理,B组大鼠给予紫景天凝胶剂的基质溶液,C组大鼠给予复方牙痛酊,D、E、F组大鼠分别给予1.0%浓度、0.5%浓度、0.25%浓度的紫景天黄酮凝胶,0.5 ml涂抹于结扎处,各组均涂药2次/日,间隔8 h,持续涂抹14天。给药14天后,检测各组大鼠GI和SBI,腹主动脉采集血样,制作牙周组织常规病理切片,HE染色及用免疫组化染色法检测大鼠牙周组织中MMP-2、MMP-9的表达,用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)法检测血清中MMP-2、MMP-9浓度。结果:1.牙周临床指标检测结果表明,治疗前各治疗组间GI和SBI无显著差异(P>0.05)。与治疗前相比,模型组大鼠GI和SBI无显著差异(P>0.05);复方牙痛酊组和紫景天低、中、高浓度组大鼠GI和SBI均明显降低,具有显著差异(P<0.01或P<0.001)。2.各组大鼠牙周病理切片观察表明,正常组牙龈内无炎症细胞浸润;模型组牙龈内炎症细胞弥漫分布,破骨细胞增生活跃,深牙周袋形成。与模型组对比,复方牙痛酊、紫景天中、低浓度组炎症细胞数量少,炎症程度减轻;紫景天高浓度组炎症细胞数量减少明显,牙周炎及牙周损伤明显改善。3.免疫组化结果显示,同型对照大鼠牙周内MMP-2、MMP-9未见明显表达,正常组表达较少。与正常组对比,模型组大鼠牙周内MMP-2、MMP-9表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,复方牙痛酊组与紫景天高、中、低浓度组的大鼠牙周组织中MMP-2和MMP-9的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与复方牙痛酊组比较,紫景天高浓度组MMP-2和MMP-9在牙周组织中的表达显著降低(P<0.05)。4.ELISA检测结果显示,与正常组对比,模型组大鼠血清中MMP-2和MMP-9的浓度显著升高(P<0.01)。与模型组相比,复方牙痛酊组大鼠血清MMP-2浓度显著降低(P<0.05),MMP-9浓度无显著差异(P>0.05);紫景天高、中、低浓度组大鼠血清中MMP-2和MMP-9浓度显著降低(P<0.05或P<0.01)。与复方牙痛酊组相比,紫景天高浓度组大鼠血清中MMP-2和MMP-9的浓度降低更显著(P<0.05或P<0.01)。结论:1.实验性牙周炎大鼠牙周组织和血清内MMP-2与MMP-9的含量与牙周炎炎症程度呈正相关。2.紫景天黄酮凝胶可抑制实验性牙周炎大鼠牙周组织及血清中MMP-2和MMP-9表达,明显减轻牙周炎症。3.紫景天黄酮凝胶治疗大鼠实验性牙周炎的效果较复方牙痛酊更好。
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