家蚕(Bormbyx mori)，又名桑蚕，属鳞翅目家蚕蛾科。其幼虫丝腺具有强大的合成和分泌蛋白质的能力，利用家蚕丝腺生物反应器安全、高效地生产药用蛋白有很好的实用前景。近几年以转基因家蚕表达外源蛋白的技术体系正被逐步建立。人胰岛样生长因子(hIGF-I)具有多种生物学功能，本研究期望通过家蚕转基因实现hIGF-I在丝腺中分泌表达，开辟hIGF-I表达新途径，提高家蚕的利用价值。 我们克隆了丝素蛋白重链基因(fibroin heavy chain，fib-H)启动子及其下游信号肽序列即fib-HS；构建了fib-HS控制红色荧光蛋白(DsRed)报告基因的瞬时分泌表达载体pSK-FibHS-DsRed-PolyA；转染细胞实验显示，该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed；家蚕注射该载体后，可在丝腺腔中检测到红色荧光，表明瞬时表达的DsRed分泌到丝腺腔，推测所克隆的序列具有信号肽的功能。 以fib-HS控制hIGF-I、家蚕杆状病毒ie-1启动子驱动新霉素抗性基因(ned)构建了基于piggyBac转座子的转基因分泌表达载体pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo，在辅助质粒的存在下，pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo转染家蚕BmN细胞，通过G418(终浓度800μg/mL)的压力筛选，获得了稳定表达MGF-I的转化细胞系，ELISA检测结果显示，hIGF-I在转化细胞中的表达水平约为29.5ng/l05cells。 采用精子介导法及基因枪法将pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo转基因分泌表达载体导入家蚕，通过G418和荧光报告基因(GFP)的双重筛选，在G0代获得3头具有明显绿色荧光的家蚕；用gfp基因的特异性引物可从呈绿色荧光的家蚕基因组中特异性地扩增出gfp基因，表明所获得的荧光蚕为转基因家蚕；反向PCR分析插入位点结果显示，未发现piggyBac转座子特异性插入位点：ELISA检测结果显示，在G0代转基因家蚕的蚕茧中hIGF-I的表达量约756ng/g