蜘蛛神经细胞的急性分离及其电压门控钠通道的膜片钳研究

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本文以拟环纹豹蛛为实验材料,探讨了蜘蛛神经细胞急性分离的方法,并对神经细胞分离培养用液的配置进行了摸索。利用全细胞膜片钳技术首次对拟环纹豹蛛经急性分离的神经细胞的电压门控性钠、钾的基本电生理学特性进行了研究。最后对比分析了拟除虫菊酯类杀虫剂氯氰菊酯及不同浓度的氯氰菊酯对拟环纹豹蛛成蛛离体中枢神经细胞Na+通道门控过程的影响。研究结果表明,解剖出的拟环纹豹蛛头胸部神经团在消化酶和培养液混合作用下能急性分离出单个神经细胞,而且适合用于膜片钳实验研究。但急性分离所获得的神经细胞须在4-6小时内用于膜片钳研究。在全细胞电压钳条件下,分别能记录到电压门控性钠、钾通道电流,其中钠电流在-60mV左右激活,+10mV左右达峰值,对河豚毒素敏感;钾电流为一系列缓慢激活、几乎没有失活的电流。用氯氰菊酯处理后,Na+通道的激活电压向超极化方向移动在-70mV,而峰值提前在+5mV左右出现,INa先增大然后迅速减小,意味着激活电压降低,通道更易激活,Na+通道关闭延迟,开放时间延长,引起重复后放和突触传递的阻断。拟除这与虫菊酯类杀虫对蜘蛛和棉铃虫药效机理相同,但作用后的记录电流与棉铃虫存在差异性。用不同浓度的氯氰菊酯处理后的神经细胞,Na+通道到达最大电流时刻各电压下产生的电流差异不大,但与达到最大电流所需时间存在负向关系,这表明不同浓度的氯氰菊酯对拟环纹豹蛛神经细胞的作用机理、作用后产生的最大效应是相同的,但随着浓度的降低神经细胞到达最大INa时间随之延长。
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