鸭Rbm24/38基因克隆、组织表达及MyoD对其调控作用研究

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RNA结合蛋白Rbm24和Rbm38是具有RNA识别结构域(RRM)的一类蛋白,能够识别并结合下游靶基因3’非编码区AU (3’-UTR)富集序列,从而发挥出多种生理功能。Rbm24与Rbm38均在成年鼠的心肌和骨骼肌中具有较高的表达量,且Rbm24对心肌细胞的生长发育以及心脏的收缩发挥着重要调节作用。本试验通过克隆鸭Rbm24和Rbm38基因,从基因序列及在骨骼肌中的表达模式分析其功能,并过表达Rbm24和Rbm38的上游基因MyoD后,从细胞水平探讨了Rbm24和Rbm38基因在成肌细胞增殖分化中的作用。主要研究结果如下:1、获得了鸭Rbm24和Rbm38基因序列,Rbm24基因测序全长为678bp,编码226个氨基酸,鸭Rbm38基因测序全长为648bp,编码216个氨基酸,鸭Rbm24与Rbm38基因序列中均包含有起始密码子和终止密码子在内的完整开放阅读框(ORF)。2、鸭Rbm24基因与原鸡的同源性最高(核苷酸同源性为94.1%,氨基酸同源性为98.7%),其次是山雀、非洲爪蛙、猪、人、猩猩、老鼠、牛。鸭Rbm38基因与山雀的同源性最高(核苷酸同源性为96.1%,氨基酸同源性为99.1%),其次是鸡、非洲爪蛙、猪、人、猩猩、老鼠、牛。3、鸭Rbm24分子进化树共分为鸟类、哺乳类、爬行类三枝,其中与鸟类关系最近,且与爬行类的关系最远。鸭Rbm38进化树同样分化为鸟类、哺乳类、爬行类三枝,其中与鸟类关系最近,但与哺乳动物的关系最远。4、鸭Rbm24与Rbm38基因均含有一个保守的RRM结构域,由78个氨基酸组成。RRM结构域中的氨基酸高度保守,而结构域两端的氨基酸序列保守性相对较低。两基因均含有两个结合RNA所必需的高度保守的亚基序(RNP1和RNP2),两个亚基序列分别由8个氨基酸和6个氨基酸组成。5、从胚胎期15日龄到出生后6周龄,Rbm24基因和Rbm38基因在腿肌均有表达。Rbm24基因存在两个表达高峰,分别是胚胎期28日龄和出生后第5周龄;Rbm38只存在一个峰值,即在出生后第5周龄。胸肌中,Rbm24基因和Rbm38基因均有表达。Rbm24基因存在胚胎期28日龄和出生后第6周龄两个表达高峰,Rbm38基因只存在第6周龄一个表达高峰。6、构建了真核表达载体pEGFP-N1-MyoD并成功转入到鸭成肌细胞。转染12h、24h、36h后,MyoD均有表达,且在转染后24h后表达量达到最大。过表达MyoD后,鸭成肌细胞的数目显著增多,Rbm24和Rbm38基因的表达量显著增高,表明过表达MyoD促进了鸭成肌细胞的分化。
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