外泌体circ50547作为胃癌标志物作用及其机制

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目的:检测胃癌患者组织、血清和血清外泌体(exosomes)内circ50547的表达情况,阐明circ50547在胃癌发展中的作用及机制,为胃癌的诊断和治疗提供新的分子标志物和策略。方法:采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪、Western blot检测血清exosomes的形态、粒径、表面标记蛋白。收集胃癌患者的癌组织及配对癌旁组织、胃癌患者及健康人血清标本,采用q RT-PCR检测组织、血清及血清exosomes中circ50547的表达水平;绘制ROC曲线,分析其诊断效能;结合临床病理资料,分析circ50547的表达水平与临床病理参数之间的相关性。采用si RNA和过表达慢病毒转染胃癌细胞株敲减和过表达circ50547并验证转染效率。应用生长曲线、CCK-8实验和平板克隆形成实验检测转染前后胃癌细胞的增殖能力;Transwell迁移侵袭实验检测转染前后胃癌细胞迁移和侵袭能力;QRT-PCR和Western blot检测基因及蛋白质表达的变化。利用生物信息学软件预测与circ50547结合的mi RNAs,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证。基因共转染实验验证circ50547和mi RNAs在生物学功能上是否具有相互作用。结果:胃癌患者和健康人血清提取的exosomes为“杯状”或“盘状”的膜性小囊泡,直径大小在100 nm左右,表达exosomes膜表面标志物CD9、CD63、CD81。QRT-PCR检测结果显示circ50547在胃癌组织、胃癌患者血清及血清exosomes、胃癌细胞及细胞上清exosomes中显著高表达,且胃癌组织中circ50547的表达水平与患者淋巴结转移、侵袭深度及TNM分期相关。ROC曲线分析显示,胃癌血清exosomes内circ50547的曲线下面积为0.7901,胃癌血清circ50547的曲线下面积为0.6825,胃癌血清exosomes内circ50547的诊断效能优于胃癌血清circ50547。在胃癌细胞株HGC-27和AGS中转染circ50547 si RNA后,circ50547表达下调。敲减circ50547抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭,抑制了上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程,干性基因表达水平下调;过表达circ50547则相反。生物信息学软件预测发现circ50547具有mi R-217结合位点,circ50547可以作为mi R-217的“海绵”发挥作用。Mi R-217抑制circ50547 3’UTR荧光素酶报告基因活性。Mi R-217在胃癌组织中表达下调,与circ50547的表达呈现负相关。转染mi R-217 inhibitor后可以逆转敲减circ50547引起的胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能的变化。结论:Circ50547在胃癌组织、胃癌血清及血清exosomes中显著高表达,是胃癌诊断潜在的新型分子标志物。Circ50547通过与mi R-217结合,发挥ce RNA的作用,促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。
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