论文部分内容阅读
背景:高血压是一种临床综合症,其特征在于身体全身循环中的血压升高,并且是全世界的主要公共卫生问题。内皮功能障碍是高血压发生的重要因素。针刺是调节血压和改善血压升高引起的各种并发症的有效手段。研究表明高血压从阳明论治疗效肯定且针刺阳明经穴具有促胃肠分泌Ghrelin的作用,而Ghrelin调控的PI3K/AKT/e NOS信号通路是内皮功能障碍的关键通路,基于此,本实验通过对自发性高血压大鼠模型的观察,从PI3K/AKT/e NOS信号通路入手,观察电针阳明经穴对自发性高血压大鼠血压、内皮功能、Ghrelin及PI3K/AKT/e NOS信号转导通路的影响,为针刺理论和临床防治高血压病提供新的思路。目的:以自发性高血压大鼠为研究对象,运用尾套法、组织形态学、酶联免疫、Western-blot等方法,研究电针阳明经穴对自发性高血压大鼠血压、内皮保护、Ghrelin及PI3K/AKT/e NOS信号转导通路的影响,明确高血压从阳明论治是否通过激活Ghrelin介导的PI3K/AKT/e NOS信号转导通路,保护内皮功能,发挥降压效应。方法:选择SPF级自发性高血压大鼠(SHR)20只和正常血压大(WKY)10只,雄性,8周龄,体重250-300克,自由进食、饮水。WKY大鼠10只为正常血压组。20只SHR大鼠按随机数字表法,随机分为自发性高血压组、电针阳明组。电针阳明组穴位选择人迎穴、曲池穴、足三里及丰隆穴。各组大鼠采用尾套法测量血压。除自发性高血压组及正常血压组外,电针阳明经组接受每周5次的电针治疗,连续4周。自发性高血压组及正常血压组每日捆绑束缚20min,时间与电针阳明经组相同,不予任何治疗,每周5次,共持续4周。30d后处死大鼠,取一侧颈动脉观察血管病理形态学变化。ELISA检测大鼠血浆中Ghrelin、NO、ET-1及TXA2的含量。免疫蛋白印迹测量腹主动脉的PI3K、AKT、eNOS的蛋白表达。结果:一、电针阳明经穴对血压的影响1.电针阳明经组在治疗前后血压发生变化,针刺具有降压效应通过4周的针刺干预,电针阳明经组的SBP较针刺前降低,下降幅度为10.65±4.28 mm Hg,差异有统计学意义(P<0.01);电针阳明经组的DBP较针刺前降低,下降幅度为2.33±4.87 mm Hg,差异有统计学意义(P<0.05)2.电针阳明经穴降压有即刻效应,且本实验中即刻效应在30min内较好,这可能与血压对针刺的敏感程度有关针刺30min、1h、2h后的SBP和DBP经配对样本t检验结果显示:针刺30min的SBP、DBP低于针刺1h、2h,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗4周和治疗2周在针刺30min、针刺1h后SBP差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4周和治疗2周,针刺在30min内的降压效应较好。3.针刺2周和4周相比,血压下降幅度不同;针刺治疗第4周降压效果优于第2周的降压效果,这可能和针刺的持续性效应有关电针组阳明经组在针刺2周时,较针刺前SBP下降11.88±1.15 mm Hg(P<0.05),差异有统计学意义,DBP差异无统计学意义;针刺4周与针刺前相比,SBP下降幅度为16.2±0.54 mm Hg(P<0.05)差异具有统计学意义,DBP下降22.25±2.63 mm Hg(P<0.05)差异具有统计学意义;且针刺4周SBP、DBP低于针刺前SBP、DBP;针刺后2周与针刺4周后比较,针刺4周后的SBP、DBP低于针刺2周后的SBP、DBP,差异亦有统计学意义。针刺2周和4周相比,血压下降幅度不同,针刺4周后的降压效果优于针刺2周时的降压效果。二、电针阳明经穴对血管内皮功能及管壁形态的影响1.电针阳明经穴可以提高SHR大鼠血浆中NO浓度;降低SHR大鼠血浆中ET-1、TXA2含量:与正常血压组大鼠相比,自发性高血压组大鼠血浆中ET-1、TXA2浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与自发性高血压大鼠相比,电针阳明经组大鼠血浆中ET-1、TXA2浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.电针阳明经穴一定程度可以改善血管内皮形态:电针阳明经组大鼠在经过4周的针刺治疗后,血管内皮细胞脱落数量降低,血管壁受损程度减轻,从形态学的角度说明针刺具有保护血管内皮的作用。三、电针阳明经穴对PI3K/AKT/e NOS通路及Ghrelin的影响1.电针阳明经穴可以激活PI3K/AKT/e NOS的信号表达:(1)与正常血压大鼠相比,自发性高血压组大鼠腹主动脉中e NOS蛋白表达降低,有差异性(P<0.01)。与自发性高血压大鼠相比,电针阳明经组大鼠腹主动脉中e NOS蛋白表达升高,差异具有统计学意义。(2)与正常血压组大鼠相比,自发性高血压组大鼠腹主动脉中AKT蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与自发性高血压大鼠组相比,电针阳明经组大鼠腹主动脉中AKT蛋白表达升高,有差异性(P<0.05)。(3)与正常血压组大鼠相比,自发性高血压组大鼠腹主动脉中PI3K蛋白表达降低。与自发性高血压大鼠组相比,电针阳明经组大鼠腹主动脉中PI3K蛋白表达升高。2.电针阳明经穴可以提高SHR大鼠血浆中Ghrelin的含量与正常血压组相比,自发性高血压大鼠血浆中Ghrelin浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与自发性高血压大鼠相比,电针阳明经组大鼠血浆中Ghrelin浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.05)结论:1.电针阳明经穴可以降低SHR大鼠血压2.针刺2周和4周相比,血压下降幅度不同;针刺治疗第4周降压效果优于第2周的降压效果,这可能和针刺的持续性效应有关。3.电针阳明经穴降压有即刻效应,且本实验中即刻效应在30min内较好。这可能和血压对针刺的敏感程度有关。4.电针阳明经组大鼠血浆中ET-1、TXA2浓度降低,NO浓度升高,针刺可以调节NO的浓度,增加其分泌和释放,减少细胞毒性对内皮的损伤,并增加血管舒张功能,从而使血压降低;电针阳明经组大鼠在经过4周的针刺治疗后,血管内皮细胞脱落数量降低,血管壁受损程度减轻,从形态学的角度说明针刺具有保护血管内皮的作用。5.电针阳明经穴可以上调PI3K/AKT/e NOS的信号转到通路,提高Ghrelin在SHR大鼠血浆中的浓度,保护血管内皮,发挥降压效应。综上所述,电针阳明经穴可提高大鼠血浆中Ghrelin、NO浓度,从而激活PI3K/AKT/e NOS信号转导通路,保护血管内皮,发挥降压效应。本研究从Ghrelin调控的PI3K/AKT/e NOS信号转导通路介导的内皮保护的角度开展研究,为高血压从阳明论治提供了新的机制,同时也为临床的开展提供了新的思路。