论文部分内容阅读
目的：验证磺胺嘧啶的亲肿瘤特性，合成以磺胺嘧啶为载体的氟尿嘧啶靶向药物，在体外及动物体内了解其抗肿瘤活性，并观察其急性毒性。 方法：（1）通过磺胺嘧啶钠（SF-Na）引发环氧乙烷开环聚合反应在磺胺嘧啶（SF）的磺酰氨基端引入高分子连接臂聚乙二醇（PEG），合成磺胺嘧啶聚乙二醇（SFPEG）。粘度法检测SFPEG的分子量。（2）应用双功能整合剂二乙撑三氨五乙酸（DTPA）标记放射性核素99mTc，放射性纸层析测定标记率。制作荷人鼻咽癌CNE2裸鼠动物模型，将放射性标记物通过尾静脉注入动物体内，6小时后测定各主要脏器及肿瘤组织的放射性，计算肿瘤组织/非肿瘤组织（T/NT）放射性比，24小时、48小时进行SPECT放射性显像。（3）通过氯甲酸三氯甲酯在SFPEG的PEG末端接入抗肿瘤药物氟尿嘧啶（5Fu），合成以SF为载体的5Fu靶向药物（SFPEG5Fu），应用紫外分光光度法计算载药率，紫外光谱、红外光谱、差式扫描量热仪进行结构表征。（4）MTT法在体外检测5Fu相应浓度为0.2μg/L、1.0μg/L、5μg/L、25μg/L、125μg/L，作用4小时及72小时对人鼻咽癌细胞株CNE2和人正常肝细胞株LO2的生长抑制率，并以5Fu和SFPEG+5Fu（30：1，m/m）为对照。制作荷鼠肝癌H22小鼠模型40只，按体重随机分为4组，每组10只。SFPEG5Fu、5Fu和SFPEG+5Fu（30：1，m/m）以相应5Fu剂量为20mg/Kg尾静脉给药，连续给药5天，相同体积生理盐水为阴性对照，给药后7天计算肿瘤抑制率，并观察各给药组荷瘤小鼠的生存期。（5）SFPEG5Fu以最大给药剂量、最大给药浓度尾静脉一次给药20只健康昆明小鼠，计算最大耐受剂量，对小鼠进行尸体解剖检查，取重要脏器进行组织学检查。 结果：（1）通过各次聚合反应研究初步表明，聚合反应随着温度的升高，反应加快，收率增加。反应的温度在100℃-110℃，反应的时间在46小时-48小时结果比较理想。分子量的测定结果表明，随着聚合温度升高，SFPEG分子量增大。（2）在生理盐水层析液中，层析时间为15-20分钟，层析后取得了10个样本进行放射性测量，Rf值为0.22-0.44，标记率为90.41％；在正丁醇：乙醇：水层析液中，层析时间为3小时，层第一军医大学硕士学位论文析后取得了15个样本进行放射性测量，Rf值为O，标记率为90.63%。99mTcSFPEGDTPA经尾静脉注射6小时后在荷人CNEZ鼻咽癌裸鼠体内的分布与游离9灿Tc对照组比较，肝脏、脾脏、骨髓的放射性明显减少（尸<0.05），肿瘤组织的放射性明显增加（尸<0.01），除了肾脏外，肿瘤组织的放射性高于其他组织、器官，肿瘤组细非肿瘤组织比值在3.27:1-4.53:1。”知TcsFPEGDTPA尾静脉注射后24小时肿瘤影增浓，注射48小时肿瘤影清晰。（3）红外光谱出现如下特征吸收峰:683cm一， （C一H/SFu），306Icm一1(C（/SFu），1242cm.1（C一F/SFu），1720em一1 （> N-COO）。紫外光谱检测在255nln处出现最大吸收值。热潜分析表明具有熔融结晶峰，其结晶熔融温度（Tm）为55.9℃。应用紫外分光光度法进行了载药量的测定。标准曲线回归方程为C265=18.80A一1 .195 （厂0.999），根据回归方程计算出载药量为3.27%。（4） SFPEGSFu对人鼻咽癌细胞株CNEZ生长抑制作用呈现剂量效应关系，作用4小时其生长抑制作用高于SFu，作用72小时其生长抑制作用低于SFu（P<0.01），SFu和SFPEG+SFu的抑制率间差别无显著性（P>0.05）。SFPEGSFu对人正常肝细胞株LoZ的生长抑制作用低于SFu（P<0.01），且生长抑制作用与作用时间无关。在给药前，SFPEGSFu组小鼠皮下瘤平均体积为0.52士0.2ocm，，给药后肿瘤平均体积为0.28土0.11 cm3，，肿瘤抑制率为“.67%。给药后SFPEGSFu组小鼠皮下瘤体积小于其他三组(P（0.01），SFu组和SFPEG+SFu组间小鼠皮下瘤体积无明显差别（P>0.05），但均小于生理盐水组（P<0.05），两组的肿瘤抑制率分别为52.38%、52.38%。SFPEGSFu组中位生存期为57.00（53.90，60.10）天，SFu组生存期47.00 （37.70，56.30）天，SFPE于SFu组生存期48.00（37.15，58.85）天，生理盐水组生存期为40.00（32.25，47.75）天。SFPEGSFu组生存期长于SFu组、SFPE于SFu组生存期（P<0.05）及生理盆水组生存期（P<0.01），SFll组、SFPEG+SFu组生存期间差异无统计学意义（P>0.05），均长于生理盐水组生存期（P<0.05）。（5） SFPEGSFu的最大耐受量为49/Kg，可以认为LDS。>4g/Kg。组织学检查发现肝细胞出现广泛的肿胀，胞浆疏松，呈现气球样变性的改变，有点状坏死，胸骨造血功能有轻到中度抑制，其他脏器组织学检查未见明显异常。 结论:SF可以被肿瘤细胞选择性浓聚。SFu通过化学反应连接到 一3-第一军医大学硕士学位论文SFPEG的末端轻基，合成以sF为载体的SFu靶向药物SFPEGSFu。SFPEGSFu体外对人鼻咽癌细胞株CNE.2具有生长抑制作用，其作用呈剂量效应关系，与SFu比较药效有一定损失:对人正常肝细胞株L02的生长抑制作用很低，且其生长抑制作用与作用时间长短无关。SFPEGSFu对荷鼠肝癌H22小鼠有明显的抑制肿瘤作用，并可延长荷瘤小鼠的生存期。sFPEGSFu对昆明小鼠的LD，>49/Kg，主要的毒性为肝