【摘 要】
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分离得到单一的生精细胞群并建立单一细胞类型的cDNA文库,就可以特异性地研究单一细胞的基因表达和有效地筛选不同生精细胞群之间差异表达的基因.激光捕获显微切割技术（Laser
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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分离得到单一的生精细胞群并建立单一细胞类型的cDNA文库,就可以特异性地研究单一细胞的基因表达和有效地筛选不同生精细胞群之间差异表达的基因.激光捕获显微切割技术（Laser Capture Microdissection,LCM）带来了细胞分离技术的革命,它能够快速、高效和精确地从复杂组织环境中捕获分离单一细胞.该研究小组已经成功地利用其捕获和分离了大鼠初级鼠母细胞和圆形精子细胞.该实验在此基础上从分离的两种细胞中提取RNA,合成双链cDNA,并进一步通过抑制性消减杂交（Suppressive Subtractive Hybridization,SSH）方法构建了大鼠初级精母细胞（RSA）和圆形精子细胞（RSB）的双向cDNA消减文库.根据SSH的结果,选择918个PCR纯化产物（603个初级精母细胞差异表达,315个圆形精子细胞差异表达）进行斑点杂交（Dot Blotting）分析,以验证差异表达并分析其表达差异的强度.利用公共数据库,对圆形精子细胞差异表达的02-66克隆进行电子克隆,使用拼接引物PCR扩增出cDNA并测序.测序全长为564bp,编码179个氨基酸,其核苷酸序列和GenBank中7个功能未知的序列高度同源.其编码蛋白结构分析显示其部分氨基酸序列和AhpC-TSA和Piwi有较高的结构相似性.AhpC/TSA家族具有广泛的细胞内还原活性.Piwi基因编码一种核质蛋白,能够通过体细胞信号传导和细胞自主调节双重机制控制原始生殖细胞（germ-line stem cells,GSCs）的分裂活性.
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