第一部分基于顺磁性微珠的高灵敏度自动化化学发光免疫分析新方法检测鸡伽马干扰素本文首次将顺磁微珠用于固定鸡伽马干扰素(chicken interferon-y, ChIFN-y)单克隆抗体,发展了一种高灵敏度的自动化化学发光免疫分析新方法用于快速检测ChIFN-γ。与费力、耗时的和灵敏度不高的生物测定法和酶联免疫分析法相比,该方法显示出明显的检测优势,如灵敏度高、检测速度快、线性范围宽、操作简单等。固定有ChIFN-γ单克隆抗体的顺磁性微珠,ChIFN-γ抗原和辣根过氧化酶标记的ChIFN-γ抗体被通入流通池,在线温育形成夹心复合结构,冲洗后通入辣根过氧化酶底物引发化学发光反应,通过发光信号和浓度之间的线性关系实现ChIFN-γ抗原的快速检测。该方法对ChIFN-γ抗原检测的线性范围为0.001-0.1ng/mL(R2=0.9976),检测限为0.87pg/mL。该检测限比目前ChIFN-γ检测的最低值(50pg/mL)小56.5倍,检测时间远小于目前报道的方法。此外,所建立的方法具有高的特异性和准确性、良好的重现性和稳定性,能实现实际样品中ChIFN-γ’决速自动化检测,并且有望应用于其它家禽细胞因子的测定,对临床诊断具有重要的应用价值。第二部分基于氧化石墨烯的超高灵敏度鸡伽马干扰素流通式化学发光免疫分析定量检测原位刺激后T细胞释放的鸡伽马干扰素(Chicken interferon-y, ChIFN-y),是评价鸡感染疾病或疫苗免疫后免疫应答的一个很好的途径。本文建立一个皮克水平伽马干扰素(Chicken interferon-y, ChIFN-y)流通式化学发光免疫分析新方法,能够超灵敏、快速、特异性地测定ChIFN-γ。生物相容性的氧化石墨烯首次引入到化学发光免疫分析领域,用于高效地固定捕获抗体。在3倍信噪比下,该方法对ChIFN-γ的检测限为0.36pg/mL,比目前ChIFN-γ的50pg/mL最低检测限值小138倍。结合流通式分析系统,整个免疫分析过程在25min内可以完成。该制作的ChIFN-γ免疫传感器展现了优良的检测和制作重现性、良好的特异性和稳定性。该方法对天然ChIFN-γ样品测定的结果,与参考方法获得的数值保持基本一致。与目前报道的ChIFN-γ测定方法相比,该方法灵活、简单、快速、灵敏。该研究工作旨在证明,超灵敏、强特异性和快速的化学发光免疫分析能够成为有潜力的模式定量测定ChIFN-γ,从而进一步研究其在禽类免疫应答中的作用。第三部分基于棒状二氧化钛纳米材料的化学发光免疫传感器检测鸡白介素-4本文将棒状的二氧化钛(TiO2)纳米材料用于固定鸡白介素-4(chicken Interleukin-4, ChIL-4)抗体,首次发展了一个高灵敏度的ChIL-4化学发光免疫传感器。将棒状Ti02-壳聚糖(CS)-ChIL-4单克隆抗体混合溶液滴涂于环氧硅烷化的玻璃片表面,可制备得到该ChIL-4化学发光免疫传感器。合成的棒状纳米Ti02具有大的比表面积和良好的生物相容性,可以有效地固定更多的ChIL-4抗体,且保持其生物活性。扫描电子显微镜(SEM)和电化学阻抗谱法(EIS)被用来表征构建的ChIL-4生物传感器。该化学发光免疫传感器对ChIL-4响应的线性范围为0.1-100ng/mL,检测限为0.045ng/mL (S/N=3).与目前的生物学分析方法相比,该检测方法灵敏度高,简单快速,成本低且实用性强。此外,该免疫传感器具有优良的特异性,良好的重复性和保存寿命,为鸡感染疾病或疫苗免疫后的免疫应答水平提供了一个具有应用前景的临床评价标准。第四部分壳聚糖-铂纳米粒子复合物为固定载体的牛伽马干扰素化学发光免疫传感器研究本文提出了一个基于铂纳米粒子的高灵敏度化学发光免疫传感器测定牛伽马干扰素(bovine interferon-y, BoIFN-y)。首先将铂纳米粒子分散于壳聚糖溶液,然后与BoIFN-γ单克隆抗体混合均匀,最后将获得的混合物滴涂于环氧硅烷化的玻璃片表面,即制得该BoIFN-γ化学发光免疫传感器。铂纳米粒子具有大的比表面积和良好固载能力,能固定更多的牛伽马干BoIFN-抗体,从而提高检测的灵敏度。利用透射电子显微镜(TEM)、紫外光谱(UV)和电化学阻抗谱法(EIS),对合成的铂纳米粒子和构建的生物传感器进行了相应的表征。该BoIFN-γ免疫传感器对BoIFN-γ检测的线性范围为0.1-120ng/mL,检测限为0.026ng/mL (S/N=3).与传统的BoIFN-γ分析方法相比,该化学发光免疫传感器具有线性范围宽、灵敏度高和分析速度快等优点。此外,该传感器表现出优良的选择性、良好的重现性和稳定性。该研究工作提供了一个具有前景的分析方法检测牛感染疾病或疫苗免疫后的BoIFN-γ水平。