研究背景随着生活环境的改变,空气污染的加重,儿童呼吸道感染的发病率进一步增加,成为儿童死亡的主要原因,对儿童的身心健康及国家的医疗卫生带来严重影响。引起下呼吸道感染的病原体的种类较多,且不同国家、不同地区下呼吸道感染的病原体也存在差异。但由于不同病原体感染后可能出现相同的临床症状,因此实验室检查对于病原体的明确起着重要作用。现临床上常用的检测病原体的方法为传统培养法,但检测耗时较长,阳性率较低,无法满足快速诊断的要求,且多数患儿在取样前都有应用抗生素史,进一步降低病原体的检出率。本研究通过多重实时荧光PCR检测支气管肺泡灌洗液(BALF),了解本地区儿童下呼吸道感染常见病原体。研究目的由于儿童独特的生理结构特点,下呼吸道感染在儿童群体中更为常见,严重威胁着儿童的身体健康。而且,由于临床上缺乏有效快速的明确病原体的实验室检查方法,导致经验性应用广谱抗生素的现象较为普遍,使多数细菌产生耐药。本课题通过多重实时PCR检测方法研究下呼吸道感染患儿病原体特点,为临床医生在儿童下呼吸道感染的诊治过程中合理使用抗生素提供依据。研究方法选取2017年1月至2018年6月因下呼吸道感染在郑州大学第三附属院呼吸科住院的108例患儿为研究对象,且该108例患儿均因病情需要行支气管镜诊断及治疗,收集其BALF。采用多重实时荧光PCR检测方法检测BALF中18种病原体(包括肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌、烟曲霉菌、肺炎衣原体、白色念珠菌、百日咳杆菌、立克次体、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠杆菌、隐球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌)。使用Microsoft Excel 2007软件包对数据进行输入和分析,分类结果以百分比(%)表示;采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析,采用χ~2或Fisher精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义。研究结果1.病原体整体检出情况纳入研究的108例标本中,有85例标本通过多重实时荧光PCR检测方法检测出病原体,阳性率为78.7%。单一病原体共检出52例,多重病原体感染共检出33例。其中,肺炎支原体共检测出38例,占总例数的35.2%,其中36月龄以上患儿有23例,占总肺炎支原体阳性患儿的61%;有29例标本检测出肺炎链球菌,占总例数的26.9%;流感嗜血杆菌检出29例,占总例数的26.9%;卡他莫拉菌检出12例,占总例数的11.1%,金黄色葡萄球菌检出情况与卡他莫拉菌相同;鲍曼不动杆菌检出3例,占总例数的2.8%,白色念珠菌及肺炎克雷伯杆菌检出情况与鲍曼不动杆菌相同。在多重病原体感染中,两重病原体感染标本有23例,三重及以上病原体感染的标本有10例。2.不同年龄组患儿病原体检出情况本研究中,29d~<12月龄患儿阳性病原体检出率82%,与其他年龄组相比该组肺炎链球菌的检出率最高,肺炎支原体的检出率最低;在12~<36月龄组患儿中病原体检出率74%,在该年龄组中,流感嗜血杆菌检出率高于其他年龄组,卡他莫拉菌及金黄色葡萄球菌在该年龄组中的检出率也较高;在36~<72月龄组患儿病原体检出率为84%,其中肺炎支原体检出率高于12~<36月龄组患儿及29d~<12月龄组患儿,且差异有统计学意义;≥72月龄组患儿共16例,最大年龄为9岁,病原体检出13例,占该年龄段的81%,肺炎支原体检出率为50%,仅次于36~<72月龄组患儿。3.不同疾病病原体检出情况支气管肺炎患儿共31例,检测出病原体的共有21例,阳性率为68%,其中,单一病原体感染的有14例,混合病原体感染检测出7例,在该组患儿中,流感嗜血杆菌检出率最高,占该组总例数的29%,其次为肺炎支原体(26%)、肺炎链球菌(16%)、金黄色葡萄球菌及卡他莫拉菌(10%),白色念珠菌及鲍曼不动杆菌(3%)。大叶性肺炎患儿共有34例,有30例患儿检测出病原体,阳性率为88%,其中,有20例为单一病原体感染,10例为混合病原体感染,在该组患儿中,肺炎支原体检出率最高,占该组总例数的65%,其次为肺炎链球菌(24%),流感嗜血杆菌(15%),卡他莫拉菌(12%),金黄色葡萄球菌(9%),鲍曼不动杆菌及肺炎克雷伯杆菌(3%)。支气管异物合并支气管肺炎患儿共22例,病原体阳性检出率为82%,其中单一病原体感染检出8例,多重病原体感染检出10例,在该组患儿中,肺炎链球菌检测出率最高,占该组总例数的45%,其次为流感嗜血杆菌(32%),肺炎支原体及卡他莫拉菌(18%),金黄色葡萄球菌(14%),鲍曼不动杆菌(5%)。在4例间质性肺炎标本中,有3例检出病原体。在6例迁延性细菌性支气管炎标本中,有4例检测出病原体。在4例类百日咳综合征标本中,有2例检测出病原体。结论1.我院因下呼吸道感染行支气管镜的儿童病原体主要是肺炎支原体、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。2.支气管肺炎患儿病原体检出排名前三的分别为流感嗜血杆菌、肺炎支原体、肺炎链球菌;大叶性肺炎组患儿肺炎支原体检出率最高,其次为肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。3.肺炎支原体及肺炎链球菌是多数混合感染的主要病原体。