论文部分内容阅读
ND2基因是线粒体DNA中的一个蛋白编码基因，构成了线粒体呼吸链复合物中的重要亚单位之一，并且参与线粒体呼吸链和氧化磷酸化功能，对能量的阐述起着非常重要的作用。初步试验时，发现ND2基因上有包含5703A>T、5727T>G在内的很多潜在的异质性位点，推测鸡mtDNA基因组的异质性具有普遍性。为了探究鸡线粒体ND2基因的异质性可能会受到哪些因素的影响，本研究采用焦磷酸测序技术对鸡不同组织、30%能量限饲组组织以及不同油脂添加组组织的异质性情况进行检测，结果表明：mtND25703A>T、5727T>G基因两位点在同一个体的十二个组织间，异质性存在很大差异。mtND25727T>G位点上，胸肌（碱基G百分比为96.9%）、腿肌（碱基G百分比为96.4%）、法氏囊（碱基G百分比为54.2%）；而mtND25703A>T位点上，胸肌组织（碱基T百分比为93%）、腿肌（碱基T百分比为94.8%）、法氏囊（碱基T百分比为47.8%），而大脑、小脑、肠、肾、肺、肝、腺胃、肌胃、心脏组织在两位点均没有异质性。说明鸡线粒体的异质性及其程度具有明显的组织差异，且在胸肌、腿肌、法氏囊组织中，具有更高的异质性。研究30%的能量限制对鸡异质性的影响，其焦磷酸测序结果显示：mtND25727T>G位点上，30%能量限制组和自由采食组都为TT纯合型（碱基T百分比为100%），表明两组肉鸡胸肌mtND25727T>G位点均没有异质性；mtND25703A>T位点上，30%能量限制组和自由采食组皆为AA纯合型（等位基因A百分比为100%），表明试验组肉鸡胸肌mtND25703A>T位点均没有异质性。说明日粮30%的能量限制，没有影响到肉鸡ND2基因mtND25727T>G和mtND25703A>T位点在胸肌的异质性。用焦磷酸测序法对饲粮中分别添加5%亚麻油、5%猪油、5%芝麻油、5%玉米油的试验组的肉鸡腿肌组织样异质性进行研究。结果： mtND25727T>G位点上，四个油脂试验组都为TT纯合型（碱基T百分比为100%），表明试验组肉鸡胸肌mtND25727T>G位点均没有异质性；mtND25703A>T位点上，四个油脂试验组皆为AA纯合型（等位基因A百分比为100%）表明试验组肉鸡胸肌mtND25703A>T位点均没有异质性。这也就说明不同油脂类型水平没有引起ND2基因mtND25727T>G和mtND25703A>T位点在胸肌的异质性及其异质程度。采用高保真Taq酶对6个个体进行克隆测序，从642bp ND2基因序列上共检测到29个变异位点，其中包括mtND25727T>G、5703A>T两个位点，共构成了21种单倍型，显示了线粒体基因变异的广泛性和异质性的潜在丰富性。本研究首次探究了能量限制和不同油脂添加类型对鸡线粒体异质性的影响，而且发现鸡线粒体的异质性及其程度具有明显的组织差异，克隆测序检测到多个变异位点，显示了线粒体基因变异的广泛性和异质性的潜在丰富性，为进一步研究线粒体的异质性提供重要参考。