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本试验用液氦取代传统的液氮作为冷源冷冻牛GV期卵母细胞，通过研究液氦对牛GV期卵母细胞发育能力的影响、不同冷源冷冻牛GV期卵母细胞对GDF9、BAX、ZAR1基因mRNA表达量的影响，分析液氦冷冻牛GV期卵母细胞的可行性，以及牛卵母细胞经液氦冷冻解冻后成熟、发育能力与所选基因表达量变化之间的关系。试验一：将牛GV期卵母细胞随机分为三组：（1）新鲜对照组；（2）液氮玻璃化冷冻组；（3）液氦玻璃化冷冻组。其中，两个试验组都选用20%乙二醇（EG）、20%二甲基亚砜（DMSO）和0.5M（moL/L）蔗糖作为冷冻液。卵母细胞经冷冻解冻后进行体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）和体外培养（IVC），并统计数据。对照组可直接进行IVM、IVF、IVC。结果显示：牛GV期卵母细胞经液氮和液氦OPS玻璃化冷冻，卵母细胞解冻之后形态正常率为81.1%vs.89.0%，差异显著（P<0.05）；成熟24h后，统计极体排放情况用以确定细胞成熟率，对照组、液氮OPS玻璃化冷冻组和液氦OPS玻璃化冷冻组的成熟率分别为69.5%、42.6%、50.6%，对照组显著高于两个冷冻组（P<0.05），但液氦组成熟效果显著高于液氮组（P<0.05）；体外受精、体外培养之后，液氦组卵母细胞的卵裂率（41.1%）和囊胚率（10.0%）显著低于对照组（64.2%，40.6%），但高于液氮冷冻组（33.0%，4.5%），差异显著（P<0.05）。结论：用液氦玻璃化冷冻法冷冻牛GV期卵母细胞是可行的，且可能由于液氦比液氮温度更低，液氦玻璃化冷冻后的卵母细胞形态正常率和细胞发育率高于液氮玻璃化冷冻；虽然液氦价格高昂，且挥发很快，势必会影响其将来的实用价值，但液氦玻璃化冷冻作为一种破解未成熟卵母细胞冷冻难题的研究方法，值得做进一步深入探索。试验二：选取与发育相关的基因GDF9、BAX、ZAR1。将牛GV期卵母细胞分为3组：对照组，液氮玻璃化冷冻组，液氦玻璃化冷冻组，每组60枚。先进行体外成熟24h后，再分别提取总RNA，反转并进行实时荧光定量检测。结果显示：GDF9基因在液氮玻璃化冷冻组中的表达量显著高于对照组和液氦玻璃化冷冻组（P<0.05）；但液氦玻璃化冷冻组和对照组之间差异不显著（P>0.05）。BAX基因在液氮玻璃化冷冻组中的表达量较对照组明显升高，差异显著（P<0.05）；液氦玻璃化冷冻组中BAX基因的相对表达量比对照组有所升高，但差异不显著（P>0.05）；尽管液氮冷冻组与液氦冷冻组中BAX基因的表达量变化也不显著（P>0.05），但后者比前者低，与对照组较接近。ZAR1基因表达量在液氮冷冻组和对照组之间差异不显著，但在液氦玻璃化冷冻组却显著降低，与前两者都差异显著（P<0.05）。结论：牛GV期卵母细胞经过液氮、液氦玻璃化冷冻后，细胞内基因的表达水平会发生改变。结合冷冻后卵母细胞后期发育效果分析，牛GV期卵母细胞液氦玻璃化冷冻后的发育情况优越于液氮玻璃化冷冻，可能与卵母细胞内与发育相关基因表达量的变化有一定联系。