基于转录组测序的意大利蝗VgR克隆和表达分析

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意大利蝗Calliptamus italicus是新疆荒漠、半荒漠草原优势危害种类之一,其生殖相关基因信息缺乏。卵黄原蛋白受体属于低密度脂蛋白受体家族,通过其介导的胞吞作用可实现卵母细胞对卵黄原蛋白的摄取。本研究首先利用Illumina高通量测序平台(HiSeq/MiSeq)对意大利蝗精巢和卵巢组织进行转录组测序,筛选得到与性腺发育相关的基因-VgR序列。在此基础上,利用RACE法克隆获得意大利蝗VgR的全长cDNA(CiVgR),并进行生物信息学分析。最后,利用qRT-PCR技术分析CiVgR在转录水平的时空表达动态。主要研究结果如下:(1)转录组测序及分析共获得718 872条unigenes,平均长度631 bp,N50为1 186 bp。通过同源性比对,成功注释254 597条unigenes,其中,Nr数据库注释占28.87%,比例最高。Nr数据库注释的unigenes与黑褐草蚁的相似基因序列最多,为10.80%。KEGG pathways分析表明,23 666条unigenes归属于251个通路。涉及生殖系统发育的通路有卵母细胞减数分裂、胰岛素信号通路、Wnt信号通路、促性腺激素释放激素信号通路、转化生长因子β信号通路以及泛素介导的蛋白水解、黄体酮介导的卵母细胞成熟、昆虫激素生物合成等。进一步筛选得到部分与性腺发育相关的基因,包括Vg,VgR,sox 21b等。(2)CiVgR的克隆CiVgR全长 5 589 bp(GenB ank登录号:MK358118),5’非编码区86 bp,3’非编码区238 bp,开放阅读框5 265 bp。该序列编码氨基酸1 754个,推测分子量约193.19 kDa,pI为5.15,N端前27个氨基酸为信号肽。序列分析显示,CiVgR具有低密度脂蛋白受体家族的4个经典保守域,即LBD、EGFD、TM和CD,不具有OLSD。系统发育分析表明,CiVgR氨基酸序列与美洲大蠊同源性较高。(3)CiVgR时空表达动态CiVgR仅在雌虫卵巢组织中表达;qPCR结果显示,CiVgR在卵黄发生前期表达水平逐渐上升,并达到峰值,在卵黄发生期表达下降。本研究在转录组测序的基础上,成功克隆了意大利蝗VgR基因,并研究其分子结构及表达模式,结果表明,CiVgR功能与卵黄发生密切相关,为深入研究意大利蝗卵黄发生的调控机制奠定了基础。
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