索马甜基因在酿酒酵母中表达的初探

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索马甜(Thaumatin, Tha)是从非洲竹竽果实假种皮中提取的甜味蛋白质。它的甜味阈值为50nmol/L,是收录在吉尼斯世界大全中世界上最甜的东西之一。成熟的索马甜是由207个氨基酸组成的单链蛋白质,分子内部有8个二硫键。这些二硫键对其高级构象的保持和恢复具有很重要的意义。酿酒酵母对重组蛋白能够进行糖基化修饰,二硫键形成和合理的空间折叠等功能,有利于保持索马甜的活性和稳定。为了解决提取的索马甜数量有限的问题,我们采用引物搭接方法搭建了酿酒酵母偏爱性Tha基因和Tha his-tag基因,并且成功构建了pYES2-Tha和pYES2-Tha his-tag真核表达载体。LiAC转化法将pYES2-Tha,pYES2-Tha his-tag和pYES2分别转化入酿酒酵母细胞INVSc1。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,含有pYES2-Tha和pYES2-Tha his-tag的酵母细胞经过2%半乳糖诱导后并没有表达索马甜蛋白。为此,我们利用pYES2-GFP载体平台,摸索诱导时间和碳源对酿酒酵母表达外源蛋白的影响。最终,我们选择最适大规模诱导的条件为2%甘油+0.5%半乳糖环境下诱导24h。遗憾的是,无论GFP还是索马甜蛋白,最适诱导条件下进行表达后均不能在SDS-PAGE上显示出明显的诱导表达条带。本研究对索马甜在酿酒酵母中诱导表达进行了初步的探索,并且建立了一种价格低廉的高效诱导方法,为后续研究提供了实验依据。
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