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目的:筛选出mir-96的靶基因,研究EPB41L3在膀胱癌组织和癌旁组织的表达差异,探究mir-96靶向调控EPB41L3对膀胱癌T24细胞增殖和迁移的影响。方法:靶基因预测网站预测mir-96的靶基因,构建野生型载体Wt-EPB41L3-3′UTR和突变型载体Mut-EPB41L3-3′UTR,共转染HKE293细胞,实验分组:Wt-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO组、Mut-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO组、Wt-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO+NC mimics组、Mut-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO+NC mimics组、Wt-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO+miR-96-5p mimics组、Mut-EPB41L3-3′UTR-pmirGLO+miR-96-5p mimics组,Lucifersae检测分析Mir-96与EPB41L3的靶定关系;通过蛋白印迹和qRT-PCR检测EPB41L3蛋白以及mRNA的表达情况,实验分组:空白组,mir-96 mimic组,mir-96 mimic NC组,mir-96 inhibitor组,mir-96 inhibitor NC组;Oncomine和UALCAN数据库在线分析EPB41L3在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达差异,以人膀胱癌组织芯片为实验研究对象,通过免疫组化检测EPB41L3基因在膀胱癌组织芯片中的表达情况;构建EPB41L3-SAP-pcDNA3.0过表达质粒,以膀胱癌T24细胞为实验研究对象,共转染mir-96 mimic和NC,实验分组:mir-96mimic+EPB41L3过表达载体组,mir-96 mimic+空载体组,NC+EPB41L3过表达载体组,NC+空载体组;划痕实验检测细胞的迁移,CCK8检测细胞的增殖,进一步确定EPB41L3是mir-96的直接功能性靶基因。结果:1.生物信息学预测miR-96的靶基因是EPB41L3。2.成功构建野生型载体EPB-mir-96-wt和突变型载体EPB-mir-96-mut,双荧光素酶报告实验证明mir-96靶向调控EPB41L3基因。3.蛋白印迹实验和qRT-PCR检测转染mir-96 mimic和mir-96 inhibitor后,mir-96 mimic组EPB41L3蛋白及mRNA的表达水平明显降低,mir-96 inhibitor组EPB41L3蛋白及mRNA的表达水平有显著的升高。4.Oncomine和UALCAN数据库在线分析结果表明,EPB41L3在膀胱癌癌旁组织中的表达要比在膀胱癌组织中的表达高(p<0.05)。5.人膀胱癌组织芯片的免疫组化实验表明EPB41L3基因在膀胱癌旁组织的表达显著高于膀胱癌组织(P=0.001)。6.划痕实验和CCK8实验结果表明,mir-96 mimic+EPB41L3过表达载体组与NC+EPB41L3过表达载体组相比,mir-96抵消了EPB41L3抑制细胞增殖和迁移的作用,进一步证明EPB41L3是mir-96的直接功能性靶基因。结论:EPB41L3为miR-96在膀胱癌T24细胞中的直接调控靶基因,EPB41L3在膀胱癌组织中的表达低于癌旁组织,表现出抑癌基因的特性,miR-96通过调控EPB41L3基因促进膀胱癌T24细胞的增殖和迁移。