【摘 要】
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目的:1.观察脑缺血再灌注大鼠造模成功后,不同时相自噬激活的情况,探究自噬与脑缺血损伤的关系。2.探讨益气活血方对脑缺血再灌注大鼠自噬及LC3蛋白表达的影响。方法:选用SPF级雄性SD大鼠90只,以随机对照为原则,其中30只入假手术（Sham）组,剩余的60只用线栓法建立大鼠MCAO模型,2h后拔出线栓形成脑缺血再灌注。制备模型成功后,然后将其分为模型（Model）组、益气活血方（YHR）组各30
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目的:1.观察脑缺血再灌注大鼠造模成功后,不同时相自噬激活的情况,探究自噬与脑缺血损伤的关系。2.探讨益气活血方对脑缺血再灌注大鼠自噬及LC3蛋白表达的影响。方法:选用SPF级雄性SD大鼠90只,以随机对照为原则,其中30只入假手术（Sham）组,剩余的60只用线栓法建立大鼠MCAO模型,2h后拔出线栓形成脑缺血再灌注。制备模型成功后,然后将其分为模型（Model）组、益气活血方（YHR）组各30只。每组按照处死时间分为3d、7d、14d三个时相。Sham组、Model组灌胃等体积的蒸馏水,YHR组灌服等体积的益气活血方。用m-NSS评分评估大鼠神经功能缺损的程度;苏木素伊红（HE）染色观察大鼠脑组织细胞病理形态变化;透射电镜（TEM）观察自噬小体（AP）的数量;免疫印迹法（WB）检测自噬标记蛋白LC3的表达。实验数据统计结果用均数±标准差（x±s）表示,统计选用单因素方差分析法,组间两两比较且方差齐时应用邦佛伦尼法,方差不齐时应用塔姆黑尼法。p＜0.05提示差异有统计学意义。结果:1.神经功能缺损评分:Sham组评分皆为0,无明显神经功能缺损症状。Model组、YHR组均表现出明显的神经功能缺损症状（p＜0.05,n=6）,提示造模成功。较Model组而言,相同时相,YHR组神经功能缺损评分皆有下降的趋势（p＜0.05,n=6）,提示YHR能促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复。2.HE染色:Sham组皮层脑组织神经元未见明显损伤,细胞形态、结构均无异常,排列规则,胞体外观呈梭形或圆形,有较大的细胞核,神经纤维纹路走向基本一致。较Sham组而言,模型制备成功后,大鼠皮层脑组织细胞形态学表现出明显的病理变化:细胞形态迥异、结构紊乱、排列不规则,神经元数量减少,细胞包膜欠完整,胞体呈三角形,胞周空间扩大,核固缩呈深色,神经纤维走向杂乱不一。与Model组相比,YHR组各时相脑组织细胞形态学出现的病理变化较之减轻。3.AP数量:Sham组可见少量AP形成;与Sham组比较,Model组三个时相AP的数量均增加（P＜0.05,n=6）;Model 3d、Model 7d、Model 14d的AP数量无明显差异（P＞0.05,n=6）。以上结果表明,局灶性脑缺血后脑组织中的自噬被激活,但3d、7d、14d无明显动态变化规律。与Model组比较,各时相的YHR组的AP数量均减少（p＜0.05,n=6）,提示YHR对自噬具有抑制作用。4.WB检测:Sham组LC3蛋白有一定的表达;与Sham组比较,Model组各时相的LC3蛋白表达上调（P＜0.05,n=6）;与Model组比较,各时相YHR组LC3表达均下调（P＜0.05,n=6）。说明YHR能下调LC3蛋白。结论:脑缺血再灌注大鼠模型制备成功后,自噬被激活,3d、7d、14d无明显动态变化规律;自噬被激活的程度与大鼠局灶神经功能缺损的程度成正相关。益气活血方可通过下调LC3蛋白,抑制自噬,改善脑缺血再灌注大鼠局灶神经功能缺损的症状。
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