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磷脂酶D （phospholipase D, PLD）普遍存在于生物界中,是重要的细胞磷脂代谢酶,通过磷酸二酯键,催化水解卵磷脂（PC）产生磷脂酸（PA）和游离胆碱。PLD亦能在醇类物质存在下催化磷脂酰基转移反应制备或合成稀有磷脂。在食品工业中起到乳化、湿润、分散作用,在医药中是抗肿瘤药物制剂的重要辅料。链霉菌是常用磷脂酶D的生产菌株,但野生菌株酶活较低,因此通过筛选及改良获得高产菌株是提高磷脂酶D酶活力的重要途径。本文以实验室保存的链霉菌LD0501为出发菌株,优化了原生质体的制备方法,并将紫外诱变单孢子和原生质体获得的UV-23和UV-p3-45作为原生质体融合的两亲本菌株,同时探究了原生质体融合的最佳条件。通过筛选以获得集双亲优良性状于一体的融合菌株,对得到的高产菌株发酵培养基中主要因素碳源和氮源进行优化,为PLD的工业化奠定理论基础。本文主要研究内容及结果如下：（1）通过单因素实验研究了链霉菌LD0501原生质体制备的影响因素。结果发现制备原生质体的适宜条件为：种子培养基中甘氨酸浓度为5.0 g/L,菌龄为72 h,溶菌酶浓度为3 mg/mL,酶解温度为30℃,酶解时间为75 min。随后,利用响应面软件对链霉菌LD0501原生质体的制备条件进行了四因素三水平实验设计,确立了最优的制备条件：酶解时间76 h,酶解温度30.2℃,溶菌酶浓度2.9g/L,菌龄70 h,其他条件不变。（2）由出发菌株制备出来的单孢子和原生质体经过系统的诱变措施筛选获得两株性状优良的高产菌株。其中高产菌株UV-23酶活较低,摇瓶发酵最大活力为3.26 U/mL,但其生长速度很快；高产菌株UV-p3-45生长速度较慢,但产PLD活力较高为4.29U/mL,将这两株作为原生质体融合的两亲本菌株。通过高温和紫外照射的处理方式对这两亲本原生质体灭活。结果表明：在55℃恒温水浴处理下,链霉菌UV-23和UV-p3-45最佳热灭活时间分别为75 min和60min；在距15 W紫外灯30 cm处照射下,最佳紫外灭活时间均为120s。并利用单因素实验探究聚乙二醇（PEG）法诱导原生质体融合的影响因素,得到最佳融合条件为：PEG4000浓度为50%,Ca2+浓度为3 g/L,融合时间为6min,融合温度为30℃。（3）原生质体融合并筛选融合子,最终获得3株产PLD能力较高和生长速度较快的具有双亲优良性状的融合菌株F-10、F-21和F-33,并对其进行遗传稳定性研究,证明其遗传稳定性良好。（4）将得到的3株高产融合菌株与亲本菌株进行发酵代谢特征的比较,发现融合菌株的发酵周期有一定的缩短,对葡萄糖的代谢情况及产PLD能力有明显优势。此外,研究发现F-10、F-21和F-33融合菌株最佳复合碳源为甘油和葡萄糖,最佳复合氮源为黄豆粉和胰蛋白胨。