酪氨酸酶(Tyrosinase)是一种含双核铜离子的金属酶,是黑色素合成过程中的关键限速酶。曲酸(Kojic acid)是真菌好氧发酵的一种产物,可以作为酪氨酸酶抑制剂,部分曲酸衍生品已在化妆品领域得到市场化。但是,曲酸对光、热敏感,易被氧化,所以寻找稳定、高效的曲酸衍生物成为科学界的一个研究热点。本课题以曲酸为原料,通过配位反应,制得一系列含Fe(III)、Zn(II)、Mn(II)、Cu(II)的曲酸金属配合物,并通过酶动力学测试了它们对酪氨酸酶的抑制作用、抑制类型。实验表明:除KA-Cu(II)(3d)没有明显酪氨酸酶抑制作用,其他三种都有明显的酶抑制作用,说明该三种金属离子的引入增强了曲酸的酶抑制效果。其中KA-Zn(II)(3b)的酪氨酸酶抑制作用最强,IC50=18μM,抑制作用为曲酸的4倍以上。经动力学分析,该类曲酸金属配合物为非竞争性抑制剂。同样以曲酸为原料,在曲酸6位与氨基酸进行Mannich反应,制得一系列曲酸氨基酸衍生物,其中曲酸蛋氨酸Mannich碱(4e)、曲酸半胱氨酸Mannich碱(4f)产率过低,纯度不够,不进行酶活性测试。通过酶动力学测试了其它化合物对酪氨酸酶的抑制作用、抑制类型。实验表明:其它4种曲酸氨基酸Mannich碱对酪氨酸单酚酶、二酚酶的抑制作用均增强,说明氨基酸的引入增强了曲酸对酪氨酸酶的抑制作用。其中,KA-Tau(4d)的抑制作用最强,IC50=10μM,抑制作用为曲酸的7倍。经动力学分析,该类曲酸氨基酸Mannich碱为竞争性抑制剂。推测原因可能是,氨基酸的引入,使得曲酸氨基酸Mannich碱与底物L-多巴的结构相似,可以与底物竞争酪氨酸酶的双核铜离子活性位点,抑制酶和底物生成中间产物,因此表现出不同于曲酸的抑制类型。在此基础上,以产率较高的曲酸甘氨酸Mannich碱(4b)为原料,制得一系列曲酸甘氨酸Mannich碱金属配合物,并通过酶动力学测试了它们对酪氨酸单酚酶的抑制作用。实验表明:只有(KA-Gly)-Zn(II)(5a),(KA-Gly)-Fe(III)(5b)的酶抑制作用略强于曲酸甘氨酸Mannich碱,说明金属离子对曲酸氨基酸衍生物的酶抑制作用增强效果不明显。中间产物和最终产物的结构分别通过13C NMR、1H NMR、IR、UV、MS、TG进行了表征。