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藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)是一种普遍存在于蓝藻(blue-green algae,又称cyanobacteria)中,含开链四吡咯结构的天然蓝色素。在活细胞中,藻蓝蛋白既可以作为蛋白存储单元,也可以作为抗氧化剂,使细胞在一定限度内免受光损伤。动物实验表明,藻蓝蛋白有抗肿瘤作用,能有效预防大肠炎等疾病。藻蓝蛋白的这些属性,使它广泛应用于食品、化妆品、医药等领域,具有广阔的应用前景。本文采用液氮研磨、反复冻融、超声破碎、高压均质和玻璃珠破碎这几种方法对野生和液态培养发状念珠藻进行破碎研究。结果表明,高压均质法破碎率最高,而反复冻融法最适合液态悬浮培养发菜藻蓝蛋白的提取,并且采用5mg/mL菌浓,在-20℃与30℃之间,用pH7.0的磷酸缓冲液为提取液,反复冻融3次处理后,藻蓝蛋白的提取得率及纯度最高。论文采用DEAE-650M结合Sephadex G-200凝胶柱层析法,分离纯化液态悬浮培养的发菜(Nostoc flagelliforme)中的藻蓝蛋白。确定DEAE-650M离子交换层析的条件为藻蓝蛋白上样量30mL,样品浓度2.34mg/mL,流速3mL/min,洗脱液为pH7.0,800mL的磷酸钾缓冲溶液,分别以0.01mol/L、0.04mol/L、O.1mol/L台阶式等度洗脱。采用SephadexG-200凝胶层析后,最终藻蓝蛋白的纯度A615/A280达到了5.321,纯化因子A615/A652为7.623。经脱盐、冷冻干燥后得到了具有经济价值的藻蓝蛋白纯品,其最大紫外可见光特征吸收波长为618nm,最大荧光发射峰为642nm。SDS-PAGE结果表明,纯化的藻蓝蛋白样品已经达到了电泳纯级别。同时,氨基酸组成分析结果表明藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白是理想蛋白质模式。藻蓝蛋白的稳定性结果显示,适合在4℃低温、避光或弱光、中性pH下保存,低浓度的蔗糖有利于其稳定性。本文所述分离纯化藻蓝蛋白的方法,具有蛋白活力高,成本低,重复性好等优点,为大规模生产提供可靠依据。