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目的运用MTT法、免疫印迹法(Western Blotting)、RT-PCR方法检测糜酶(Chymase)对肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)中α-SMA(α-smooth muscle actin)、TGF(Transforming growth factor, TGF)-β1蛋白表达量及TGF-β1mRNA、 Col-ImRNA的表达。探讨糜酶对肝星状细胞增殖及转分化的影响及在肝纤维发生、发展中的作用。方法1.将试验用Wisrar雄性大鼠乙醚麻醉后仰卧固定在手术台上,行“十字”切口打开腹腔,暴露肝脏、门静脉及腔静脉。2.用灌注液对肝脏进行处理并得到纯化的HSC,将培养的3-4代细胞用于实验,并分成空白对照组、lng/ml、10ng/ml、 100ng/ml糜酶组。3.采用MTT比色法检测HSC的增殖并计数OD值。4. Western blotting检测蛋白表达并定影。5.应用RT-PCR技术检测HSC上TGF-β1 mRNA、Col-I mRNA的表达。结果1.糜酶可明显促进HSC增殖,在观察的范围内(1ng/m1、10ng/ml、100ng/m1)呈浓度依赖性,随着糜酶浓度增高,OD值也升高,糜酶浓度最大时可达对照组的1.45倍(P<0.05)；2. Western Blotting检测结果显示,在糜酶刺激的肝星状细胞中,α-SMA及TGF-β1的表达明显增加(P<0.05)；3. RT-PCR法检测HSC上表达TGF-β1mRNA及Col-I mRNA的表达明显增强,在观察范围内,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论1糜酶显著促进肝星状细胞的增殖,HSC增殖与糜酶浓度呈依赖性。2.糜酶激活肝星状细胞α-SMA及TGF-β1蛋白表达量呈浓度依赖性。3.糜酶激活肝星状细胞TGF-β1mRNA及Col-ImRNA表达量与糜酶剂量呈依赖性。4.肥大细胞糜酶明显激活肝星状细胞,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。