恶性肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病,寻找有效的抗癌药物和方法,是世界医学面临的重要课题。祖国医学认为热毒是恶性肿瘤的主要病因病理之一,正气虚衰、热毒内聚是癌症的重要病理基础,热毒与痰湿或水湿胶结成为癌症的主要病机。本课题组近年从热休克蛋白(heat shock protein HSP)与中医热证的关系着手进行了一系列研究,提出清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70免疫原性发挥其抗肿瘤的作用,并从免疫学角度研究白花蛇舌草对恶性肿瘤HSP70免疫原性的诱导机制。前期实验主要通过观察荷瘤鼠腹水H22肝癌细胞HSP70表达及外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞表达,从整体方面研究发现清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70免疫原性发挥其抗肿瘤的作用。随着医学的发展,对HSP70研究的逐渐深入,人们发现HSP70在肿瘤特别是在恶性肿瘤中有较高表达。故近年来将其用在肿瘤方面的研究也越来越多,尤其是在肿瘤免疫方面的研究。目前主要观点认为HSP70可以携带多种肿瘤抗原肽,这些抗原肽被称为“热休克蛋白70多肽复合物”(HSP70-PC),主要起“分子伴侣”的作用,将肿瘤多肽分子直接或间接呈递给机体T淋巴细胞,从而引起机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应。近年来,分子生物学技术被广泛应用于肿瘤的研究,人们已经认识到肿瘤的发生与纽胞基因组的变化密切相关。主要观点认为是由于控制细胞生长和分化的基因失活所致。P16是近年发现的一种抑癌基因,正常情况下P16蛋白通过与细胞周期关键酶周期素依赖性激酶4(CDK4)结合,拮抗CDK4的作用,从而阻止细胞由G1期进入S期(DNA合成期),使细胞增殖受阻。P16基因蛋白失活,就会引起细胞周期失控,从而引起癌变。目前研究发现在大多数肿瘤中有P16基因的突变和缺失,说明P16基因功能的失活可导致肿瘤细胞的无限性生长。因此,进一步明确P16基因与肿瘤的关系有助于揭示肿瘤发生机制,对中医临床的诊断、治疗和预后等方面都有着重要的意义。本部分课题主要承接前面的实验,目的:探讨清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70、P16的表达而发挥其免疫原性抗肿瘤的作用及抑制和杀灭肿瘤细胞的作用,并从免疫学、分子生物学的角度研究白花蛇舌草对恶性肿瘤HSP70、P16的诱导机制。方法:本实验承接前期实验,首先采取经中药治疗后的小鼠腹水肝癌细胞各分为封闭组和未封闭组,封闭组给予HSP70单克隆抗体封闭癌细胞表达的HSP70抗原,未封闭组用经中药治疗后的H22肝癌细胞,以相同剂量分别免疫小鼠两次后给小鼠接种体外培养的H22肝癌细胞,同时设1640缺省对照组。形成瘤体后制成石腊切片。经HE染色后对小鼠肿瘤组织、脾组织和胸腺组织进行病理形态学观察,采用免疫组化标记法对实体瘤组织中的CD4~+、CD8~+、HSP70、P16进行检测。结果:1、白花蛇舌草未封闭组肿瘤组织坏死灶较其它各组更为明显,并见较多淋巴细胞浸润;白花蛇舌草未封闭组胸腺皮质增厚;脾脏白髓增厚、组织致密,见大量巨噬细胞。白花蛇舌草封闭组,党参未封闭和封闭组胸腺及脾脏病理改变与空白对照组比较,除脾脏可见少量巨噬细胞外,未见其它明显不同。2、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8~+、封闭组CD4~+表达明显上调、党参封闭组CD4~+表达也明显上调;党参未封闭及封闭组CD4~+、CD8~+表达与空白对照组比较也有所增高,但差异无显著性意义;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8~+表达明显上调。3、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组和党参未封闭组HSP70蛋白表达明显上调;与党参未封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组HSP70蛋白表达上调更明显。4、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组、封闭组P16表达明显上调;党参未封闭组、封闭组P16表达也上调,但效果没有白花蛇舌草组明显。与空白对照组比较无明显改变,差异无显著性意义。结论::1、白花蛇舌草可诱导恶性肿瘤HSP70的高表达,增强机体的CD4~+、CD8~+CTL反应而达到对肿瘤的主动免疫杀伤作用。2、白花蛇舌草可诱导恶性肿瘤P16的高表达而达到有抑制癌细胞的增长的作用。3、经白花蛇舌草治疗后的具有HSP70、P16高表达的腹水肝癌细胞确可诱导小鼠对该肿瘤的主动免疫作用和抑制癌细胞的增长或直接杀灭癌细胞的作用,其机理可能通过提高机体CD4~+、CD8~+CTL反应和提高机体P16的表达而实现。